老年神经变性疾病机制研究的基础：人α—突触核蛋白基因在原核细胞中的蛋白表达

目的：为提供人α—突触核蛋白(α—synuclein)抗原，制备抗体以研究其自身聚集在老年神经变性疾病病理机制中所起作用，重组质粒载体、进行DNA测序，以用于α—突触核蛋白基因在原核细胞中的蛋白表达。方法：将质粒pcDNA3NACO(pcDNA3α-svnuclein cDNA)和质粒载体proEXMTHT1分别进行酶切，取α—突触核蛋白cDNA片段，重组于proEX MTHT1质粒载体上；酶切鉴定后测序；再将重组质粒proEXNACP转染进入DH5α大肠杆菌体内；用IPTG诱导α—突触核蛋白基因产生蛋白；将α突触核蛋白纯化后行Western杂交。结果：质粒pnoEX MTHT1和pcDNA3NACP经限制性内切酶消化分别得到4750bp和550bp DNA片段。α—突触核蛋白基因在原核细胞中蛋白表达量为10mg／L。表达蛋白经Western杂交证实为α—突触核蛋白。结论：α—突触核蛋白基因在原核细胞的蛋白表达可作为体内外研究老年神经变性疾病病理机制的基础研究。