| 应用CRISPR/Cas9基因编辑系统对HEK293细胞系TSC1基因稳定敲除效果的实验鉴定 |
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| 引用本文： | 王 晶,高 倩,陈健康,刘家云. 应用CRISPR/Cas9基因编辑系统对HEK293细胞系TSC1基因稳定敲除效果的实验鉴定[J]. 现代检验医学杂志, 2021, 0(4): 129-131. DOI: 10.3969/j.issn.1671-7414.2021.04.027 |
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| 作者姓名： | 王 晶 高 倩 陈健康 刘家云 |
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| 作者单位： | （空军军医大学第一附属医院临床检验研究所，西安 710032） |
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| 摘 要： | 目的 利用成簇规律间隔短回文重复序列/ 成簇规律间隔短回文重复序列相关蛋白（clustered regularly interspacedshort palindromic repeat/CRISPR-associated protein，CRISPR/Cas9）基因编辑系统在HEK293 细胞系中对TSC1 基因稳定敲除，并对其敲除效果进行鉴定。方法 根据TSC1 基因的序列设计sgRNA，将sgRNA 克隆到载体lentilCRISPRv2 上，将连接产物转化至Stbl3 感受态细胞，对菌液进行测序鉴定。将鉴定成功的lentiCRISPRV2-sgTSC1 质粒转染至HEK293细胞，加入嘌呤霉素进行筛选，挑选单细胞克隆进行PCR 鉴定，选取条带单一的细胞株用Western blot 鉴定TSC1 基因的表达。结果 成功构建lentiCRISPRV2-sgTSC1-1/2 重组质粒，并利用该质粒完成对TCS1 基因的定点切割，Westernblot 结果显示细胞中无TSC1 表达。结论 用CRISPR/Cas9 系统成功构建TSC1 基因敲除的稳定细胞株，为后续实验奠定了基础。
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| 关 键 词： | 成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)/CRISPR 相关蛋白9（Cas9） 结节性硬化症 基因敲除 结节性硬化症1 基因 |
Construction and Identification of TSC1 Gene Knockout Stable Cell Line inHEK293 Using CRISPR/Cas9 Gene Editing System |
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| WANG Jing,GAO Qian,CHEN Jian-kang,LIU Jia-yun. Construction and Identification of TSC1 Gene Knockout Stable Cell Line inHEK293 Using CRISPR/Cas9 Gene Editing System[J]. Journal of Modern Laboratory Medicine, 2021, 0(4): 129-131. DOI: 10.3969/j.issn.1671-7414.2021.04.027 |
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| Authors: | WANG Jing GAO Qian CHEN Jian-kang LIU Jia-yun |
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| Affiliation: | (Research Institute of Clinical Laboratory Medicine, the First Affiliated Hospital of the Air Force Medical University,Xi’an 710032, China) |
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