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| 人自身抗原U1RNP 70K的酵母重组分泌表达及斑点免疫金渗滤检测法的建立 | |
| 引用本文： | 杨湘越,张惠菊,徐秀云,兰小鹏,朱忠勇. 人自身抗原U1RNP 70K的酵母重组分泌表达及斑点免疫金渗滤检测法的建立[J]. 医学研究生学报, 2011, 24(9) |
| 作者姓名： | 杨湘越 张惠菊 徐秀云 兰小鹏 朱忠勇 |
| 作者单位： | 南京军区福州总医院解放军临床检验医学研究所,福州,350025 |
| 基金项目： | 福建省青年人才科技创新基金(2002J060) |
| 摘 要： | 目的人自身抗原U1RNP 70K通常采用组织提取法或原核表达获得。文中用基因克隆技术,在毕赤酵母中表达人U1RNP 70K自身抗原,并建立斑点免疫金渗滤检测法。方法 PCR扩增U1RNP 70K基因,与酵母表达载体pPIC9k重组,构建表达质粒pPIC9k-U1RNP 70K。用电穿孔法转化酵母菌SMD1168,在MD平板上筛选重组克隆,用G418快速筛选高拷贝转化子,阳性克隆经甲醇诱导表达后,培养上清液用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western b lot)鉴定。用所表达的蛋白包被硝酸纤维素膜,建立检测U1RNP抗体的斑点免疫金渗滤法(dot immuogold filtrationassay,D IGFA)。结果 PCR产物约为1300 bp,接近于预期的1314 bp,pPIC9k-U1RNP 70K重组阳性克隆测序结果与Gen-Bank中的U1RNP 70K序列完全一致,双酶切鉴定正确,表达产物U1RNP 70K的相对分子质量约70 000。W estern b lot证实表达产物具有天然U1RNP 70K分子的免疫原性,阴性对照菌无目的条带表达。D IGF... |
| 关 键 词： | 自身抗原 U1RNP70K 克隆 表达 巴斯德毕赤酵母 斑点免疫金渗滤法 |
Secreted expression of recombinant human autoantigen U1RNP 70K in methylotrophic yeast Pichia Pastoris and establishment of dot immunogold filtration assay |
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| YANG Xiang-yue,ZHANG Hui-ju,XU Xiu-yun,LAN Xiao-peng,ZHU Zhong-yong. Secreted expression of recombinant human autoantigen U1RNP 70K in methylotrophic yeast Pichia Pastoris and establishment of dot immunogold filtration assay[J]. Bulletin of Medical Postgraduate, 2011, 24(9) | |
| Authors: | YANG Xiang-yue ZHANG Hui-ju XU Xiu-yun LAN Xiao-peng ZHU Zhong-yong |
| Abstract: | Objective Human autoantigen U1RNP 70K is normally obtained by tissue extraction or prokaryotic expression.In this study,we cloned and expressed human autoantigen U1RNP 70K in methylotrophic yeast Pichia Pastoris and established a new dot immunogold filtration assay(DIGFA).Methods The gene of U1RNP 70K was cloned by PCR,and the recombinant plasmid pPIC9k-U1RNP 70K was transformed into yeast SMD1168 by electroporation.The positive clones were screened in MD plates.The high copy number transformants were rapid... |
| Keywords: | Autoantigen U1RNP 70K Cloning Expression Pichia Pastoris Dot immunogold filtration assay |
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