大肠杆菌-分支杆菌穿梭表达质粒的构建及外源基因人白细胞介素-2在大肠杆菌和卡介苗中的表达

目的构建和鉴定大肠杆菌－分支杆菌穿梭表达质粒，检测外源基因在大肠杆菌和卡介苗（ＢＣＧ）中的稳定表达。方法采用基因工程技术构建大肠杆菌－分支杆菌穿梭表达质粒，用电穿孔法将重组质粒ＰＺＳＩＩ－Ｉ转化ＢＣＧ，用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）和ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定外源基因白细胞介素－２（ＩＬ－２）在ＢＣＧ和大肠杆菌中的表达。结果外源基因人ＩＬ－２基因能在大肠杆菌和ＢＣＧ中稳定表达，并能从ＢＣＧ中分泌到胞外。结论构建的ＢＣＧ重组体，能表达和分泌人ＩＬ－２。ＢＣＧＨＳＰ６５启动子表达质粒能启动外源基因在ＢＣＧ和大肠杆菌中的表达，同时使外源基因分泌至ＢＣＧ之外，但不能分泌至大肠杆菌之外。