诱导子宫内膜癌细胞DNA错配修复及肿瘤增殖抑制基因启动子CpG岛去甲基化修饰的研究

目的：研究在用5-杂氮-2’脱氧胞苷（5-Aza-CdR）诱导体外培养的人子宫内膜癌细胞株HEC-1-A中，DNA错配修复基因hMLH1、hMSH2及细胞周期调控基因p16启动子CpG岛的去甲基化，及对于该细胞的增殖抑制作用。方法：体外培养人子宫内膜癌细胞株HECq—A；利用MTT比色法检测5-Aza-CdR对于HEG-1-A的增殖抑制的影响；利用流式细胞术（FCM）分析药物处理前后HE（2-1-A的细胞周期；利用重亚硫酸盐处理及甲基化特异性PCR（MS-PCR）检测hMLH1、hMSH2及p16基因启动子cpG岛的甲基化修饰；提取药物处理前后HE（2-1-A细胞的总蛋白，利用Westernblotting检测hMLH1、hMSH2及p16蛋白的表达情况。结果：5-Aza-CdR对于人子宫内膜癌细胞株HED-1-A体外增殖抑制呈明显的剂量依赖性[IG50，为（0．71±0．05）μmol·L1]；FCM分析显示HEC-1-A细胞在5Aza-CdR处理前后均呈现明显的细胞周期差异，并且药物组细胞表现为G0／G1期（P〈0．05）阻滞。MS-PCR分析5-Aza-CdR显示著诱导hMLH1、hMSH2基因启动子CpG岛的去甲基化修饰。Westernblotting检测发现IC50剂量的5-AzaCdR处理HEC-1-A细胞前后，hMLH1、hMSH2及p16的表达量为（111．30±3．17）％、（76．99±1．19）％和（97．63±1．28）％明显高于空白对照组（P〈0．05），提示该药物有提高上述蛋白表达的作用。结论：5-AzaCdR可诱导人子宫内膜癌细胞株HEC-1-A中，hMLH1、hMSH2及p16启动子CpG岛的去甲基化修饰，从而有效抑制该细胞的体外增殖。

Study of Inducing CpG Islands Demethylated on Promoters of DNA Mismatch Repair Gene and Tumor Inhibition Factor on Human Endometrial Carcinoma Cells

Objective:To study both the effect of proliferation inhibited of human endometrial carcinoma cell lines HEC-1-A,and CpG islands demethylated on promoters of DNA mismatch repair genes hMLH1,hMSH2 and tumor inhibition factor p16 processed by 5-Aza-CdR in vitro were investigated. Methods:HEC-1-A carcinoma cell lines exposed to the 5-Aza-CdR for 72 h produced,the growth inhibitory effect of 5-Aza-CdR on HEC-1-A cells was detected by MTT chromatometry. Cell cycles difference of the research groups processed or n...