痛泻要方含药血清对结肠癌HCT116细胞周期及凋亡的干预作用及机制研究＊

目的观察痛泻要方含药血清对结肠癌HCT116细胞周期及凋亡的影响,并探讨其可能的生物学机制。方法将结肠癌HCT116细胞分为不同浓度空白组和痛泻要方含药血清组,采用细胞增殖与活性检测-8（CCK8）法检测24、48和72h各组对HCT116细胞活力的影响;使用流式细胞术检测不同浓度痛泻要方含药血清诱导HCT116细胞凋亡及周期阻滞的作用;通过蛋白免疫印迹法（Westernblot）检测经不同浓度痛泻要方含药血清干预后细胞周期调控蛋白P21（P21）、细胞周期蛋白B1（CyclinB1）、细胞周期蛋白依赖性激酶-1（CDK1）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）、磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶（p-PI3K）、蛋白激酶B（Akt）和磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）蛋白表达的变化。结果CCK8结果显示,与10%空白组相比,10%痛泻要方含药血清仅在48h对HCT116细胞活力具有明显抑制效应（P<0.01）;与20%空白组比较,20%痛泻要方含药血清在48和72h可抑制HCT116细胞活力（P<0.01,P<0.05）,且空白血清含量增加并不会抑制细胞活力,故后续实验选择10%空白血清、48h作为药物对照和干预时间;流式细胞术表明,与空白组相比,10%和20%痛泻要方含药血清干预48h后能将HCT116细胞周期阻滞在G2/M期（P<0.01）,并诱导HCT116细胞凋亡（P<0.05）,且与药物浓度呈正相关;同时,Westernblot结果显示,痛泻要方含药血清能够不同程度上调P21、Bax表达,下调CyclinB1、CDK1、Bcl-2、p-PI3K、p-Akt表达（P<0.05,P<0.01）。结论痛泻要方能够抑制结肠癌HCT116细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路有关。