清脑益智方通过调控PI3K/Akt信号通路抗缺氧复氧诱导皮层神经元细胞凋亡的实验研究

目的观察清脑益智方含药脑脊液对缺氧复氧（hypoxia/reoxygenation，H/R）神经元存活率、凋亡及PI3K/Akt信号转导通路的影响，探讨清脑益智方治疗血管性痴呆的部分机制。方法原代培养皮层神经元，将神经元细胞（CNC）按照1×106的浓度接种于细胞培养板，将CNC分为正常组（简称NC组）、缺氧复氧组（简称MC组）、正常脑脊液组（简称N-CSF组）、清脑益智方含药脑脊液高剂量组（简称QN-H组）、清脑益智方含药脑脊液低剂量组（简称QN-L组）、恩必普组（简称NBP组）。除NC组外，其余各组均在添加相应干预措施后进行缺氧24 h复氧24 h处理。采用CCK-8试剂盒检测细胞活力；采用TUNEL法检测细胞的凋亡情况；采用Western blot法检测磷酸化PI3K及磷酸化Akt蛋白表达；采用逆转录PCR（RT-PCR）法检测PI3K、Akt、mTOR基因表达。结果与NC组比较，MC组CNC活力（OD值）下降 （P<0.01）。CNC凋亡数目明显增多（P<0.01）。PI3K、Akt、mTOR基因表达均显著降低，p-PI3K、p-Akt蛋白表达升高（P<0.05）；与MC组比较，QN-H组OD值升高明显（P<0.01）；QN-H、QN-L、NBP组神经元凋亡数目明显减少（P<0.01），其中QN-H组神经元凋亡数目较NBP组更少（P<0.01）；QN-H组PI3K、Akt、mTOR基因表达水平均提高（P<0.05， P<0.01），QN-L组PI3K、Akt基因表达水平亦升高 （P<0.01）；QN-H、QN-L、NBP组的p-PI3K蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论清脑益智方能提高缺氧复氧致皮层神经细胞活力，减少缺氧复氧引起的皮层神经元的凋亡数目，此作用可能与清脑益智方对PI3K/Akt信号转导通路的调节有关。