| 妊娠相关血浆蛋白A的原核表达及蛋白纯化 |
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| 引用本文： | 曾昭伟,常艳敏,王学谦. 妊娠相关血浆蛋白A的原核表达及蛋白纯化[J]. 临床检验杂志, 2016, 0(3): 186-189 |
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| 作者姓名： | 曾昭伟 常艳敏 王学谦 |
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| 作者单位： | 天津市南开医院检验科，天津 300100,天津市南开医院检验科，天津 300100,天津市南开医院检验科，天津 300100 |
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| 基金项目： | 天津市卫生局科技基金（2013KY24）。 |
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| 摘 要： | ![]()
目的构建原核表达PAPP-A重组蛋白,并对蛋白质进行纯化。方法根据DNAstar软件分析获得的编码PAPP-A特异抗原表位,利用Primer Premier 5.0软件设计引物,以PAPP-A c DNA-质粒转化菌液为模板,进行PCR扩增。PAPP-A的DNA和p ET42a质粒分别双酶切,经琼脂糖凝胶电泳及胶回收后进行连接反应,转化至大肠埃希菌Top10,筛选阳性克隆经测序鉴定正确后,转化至大肠埃希菌BL21,诱导产生PAPP-A重组蛋白,利用镍柱初步纯化及离子交换层析柱进一步纯化,用SDS-PAGE及DEAE层析鉴定重组抗原蛋白。结果筛选出抗原表位集中区,在大肠埃希菌BL21中高效表达了重组的PAPP-A蛋白,经过镍柱及离子交换层析纯化后,PAPP-A浓度为0.22 g/L,DEAE层析分析证实其纯度较高。结论成功筛选出PAPP-A的抗原表位集中区,并制备了重组抗原蛋白,为PAPP-A的后续临床研究提供依据。
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| 关 键 词： | 妊娠相关血浆蛋白A；抗原表位；原核表达 |
| 收稿时间： | 2016-02-08 |
Prokaryotic expression and purification of pregnancy-associated plasma protein A |
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| Abstract: | ![]()
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| Keywords: | pregnancy-associated plasma protein A epitope prokaryotic expression |
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