| 酵母双杂交报告基因β-半乳糖苷酶活性测定方法的研究 |
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| 引用本文： | 郜尽,王海侠,李京敬,俞雁.酵母双杂交报告基因β-半乳糖苷酶活性测定方法的研究[J].上海交通大学学报(医学版),2009,29(2). |
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| 作者姓名： | 郜尽 王海侠 李京敬 俞雁 |
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| 作者单位： | 1. 上海交通大学,农业与生物学院上海市兽医生物技术重点实验室,上海,200240
2. 安徽科技学院理学院,凤阳,233100 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划)，安徽省优秀人才基金 |
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| 摘 要： | 目的 建立标准的酵母双杂交系统报告基因表达的β-半乳糖苷酶活性测定方法.方法 采用o-硝基-β-D-半乳糖苷(ONPG)为底物,以液氮反复冻融破碎酵母细胞壁,通过比较不同测定时间、接种阳性克隆数目、转化方法以及酵母株对β-半乳糖苷酶酶活的影响,确定最佳酶活测定条件. 结果相同条件下,单个克隆之间的酶活有差异,相对标准偏差(RSD)＞8%;相同条件下,Y187酵母株比AH109酵母株酶活高18～20倍,并且本底水平很低甚至没有;双倍体酵母的酶活介于两个单倍体酵母之间,同预计一致;质粒顺序转化与共转化在AH109 中差异有统计学意义(P＜0.001),而在Y187中没有明显差异(P＞0.05). 结论测定酵母双杂交报告基因β-半乳糖苷酶的活性宜采用Y187酵母株,酶活变化范围大,本底小,受转化方法影响小,测定时选取5个以上阳性克隆混合培养更有利于酶活的准确测定.
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| 关 键 词： | 酵母双杂交 β-半乳糖苷酶 蛋白互作 酶活测定 |
Research on β-galactosidase detection assay for yeast two-hybrid system |
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