| 植烷酸氧化酶真核表达载体的构建及其细胞内定位 |
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| 引用本文： | 孙明晶,胡水旺,夏高晓,姜勇.植烷酸氧化酶真核表达载体的构建及其细胞内定位[J].热带医学杂志,2010,10(5). |
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| 作者姓名： | 孙明晶 胡水旺 夏高晓 姜勇 |
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| 作者单位： | 南方医科大学病理生理学教研室广东省蛋白质组学重点实验室; |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金委员会-广东省人民政府自然科学联合基金重点项目，国家自然科学基金，广东省自然科学基金，广州市科技计划项目 |
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| 摘 要： | 目的 构建小鼠植烷酸氧化酶(Phyh)真核表达载体,并观察其在NIH 3T3细胞中的表达定位情况.方法 提取BALB/c小鼠肝脏组织的总RNA,通过RT-PCR扩增得到Phyh编码序列,将其克隆到真核表达载体pcDNA3上;对阳性克隆进行PCR、酶切和测序鉴定,利用脂质体转染方法转染NIH 3T3细胞;使用细胞免疫化学技术对重组质粒pcDNA3/HA.Phyh在NIH 3T3细胞中的表达及蛋白定位进行分析.结果 PCR、双酶切和测序鉴定表明,pcDNA3/HA-Phyh真核表达质粒构建正确;转染实验发现,该质粒能够在NIH 3T3细胞中表达,表达产物主要定位在细胞质中.结论 成功构建了带HA标签的小鼠Phyh真核表达载体,该载体能够在哺乳动物细胞NIH 3T3中表达,为进一步研究Phyh的细胞内生物学功能提供了一个重要的工具.
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| 关 键 词： | 植烷酸氧化酶 载体构建 蛋白定位 |
Construction of Eukaryotic Expression Vector of Phytanoyl-CoA Hydroxylase |
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| SUN Ming-jing,HU Shui-wang,XIA Gao-xiao,JIANG Yong.Construction of Eukaryotic Expression Vector of Phytanoyl-CoA Hydroxylase[J].Journal Of Tropical Medicine,2010,10(5). |
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| Authors: | SUN Ming-jing HU Shui-wang XIA Gao-xiao JIANG Yong |
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| Institution: | SUN Ming-jing,HU Shui-wang,XIA Gao-xiao,JIANG Yong (Department of Pathophysiology,Southern Medical University,Key Laboratory of Proteomics of Guangdong Province,Guangzhou 510515,China) |
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| Abstract: | Objective To construct the eukaryotic expression vector that expresses the fusion protein of phytanoyl-CoA hydroxylase (Phyh),and determine the cellular localization of the expression product in NIH3T3 cells. Methods Total RNA from the liver of BALB/c mice was extracted and the corresponding coding sequences of mouse Phyh (GenBank accession no. NM-010726) were amplified by RT-PCR and cloned into pcDNA3 with hemagglutinin (HA) tags. Before transfection,pcDNA3/HA-Phyh was identified and confirmed by double di... |
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| Keywords: | phytanoyl-CoA hydroxylase vector construction protein localization |
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