Metformin与AMPKγ亚基结合位点的探究

目的:基于前期Metformin与AMPKγ亚基结合的研究，进一步确认二者间的结合机制。方法:采用分子对接方法模拟Metformin与AMPKγ亚基潜在的结合位点，通过定点突变技术对AMPKγ亚基进行修饰，以荧光滴定法为检测方法，检测Metformin对突变前后的AMPKγ内源荧光猝灭的改变。结果:获得一系列AMPKγ亚基的突变体AMPKγ M84A、T88A、D89A、R117A、K126A及 I149A，比较发现Metformin与AMPKγ的解离常数KD值为（3.76±0.45） μmol/L，与突变体AMPKγ T88A的KD值约为未突（36.15±6.91） μmol/L，约为变前的10倍，提示88位中的苏氨酸T可能是Metformin的结合位点之一。结论:该结果一方面阐明Metformin与AMPKγ的结合情况，另一方面也为以AMPKγ亚基为靶点的抗肿瘤药物设计提供理论指导。