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| 细菌内快速构建两种用于肝纤维化基因治疗的重组复制缺陷型腺病毒 | |
| 引用本文： | 林勇,谢渭芬,张忠兵,陈伟忠,张新,曾欣,陈岳祥. 细菌内快速构建两种用于肝纤维化基因治疗的重组复制缺陷型腺病毒[J]. 第二军医大学学报, 2003, 24(6): 654-657 |
| 作者姓名： | 林勇 谢渭芬 张忠兵 陈伟忠 张新 曾欣 陈岳祥 |
| 作者单位： | 1. 第二军医大学长征医院消化内科,上海,200003 2. 国家人类基因组南方研究中心 |
| 基金项目： | 上海市青年科技启明星计划项目( 0 0 QB14 0 5 4) |
| 摘 要： | 目的 :在大肠杆菌内快速构建两种分别含有人肝细胞生长因子 (hepatic growth factor,HGF)和非分泌型人尿激酶型纤溶酶原激活剂 (urokinase- type plasm inogen activator,u PA) c DNA片段的重组复制缺陷型腺病毒。方法 :分别将人 HGF和 u PA c DNA片段与穿梭载体 p Track- CMV连接 ,线性化后与骨架载体 Ad Easy- 1在大肠杆菌 BJ5 183内同源重组获得腺病毒载体 p Ad HGF和 p Adu PA,经 2 93细胞包装后得到复制缺陷型重组腺病毒 Ad HGF和 Adu PA;将 Ad HGF和 Adu PA分别体外感染肝细胞株 L0 2 ,以 Northern印迹法和 Western印迹法检测两种病毒在肝细胞中的表达。 结果 :连接、重组后通过酶切和测序法筛选出病毒质粒 p Ad HGF和 p Adu PA;经 2 93细胞包装 ,3d后均观察到绿色荧光蛋白明显表达 ,Cs Cl梯度离心纯化最终分别获得 4× 10 1 0 efu/ m l滴度的重组病毒 Ad HGF和 6× 10 1 0 efu/ ml Adu PA;两种病毒体外感染肝细胞 3d后 ,HGF和u PA表达均明显增加。结论 :细菌内同源重组制备复制缺陷型腺病毒 ,纯化过程简单 ,重组腺病毒在肝细胞中均高效表达 ,为肝细胞移植基因治疗肝纤维化提供了新的手段 |
| 关 键 词： | 肝纤维化 基因治疗 细菌内快速构建 重组复制缺陷型腺病毒 治疗 |
| 文章编号： | 0258-879X(2003)06-0654-04 |
| 修稿时间： | 2002-09-21 |
Rapid construction of 2 kinds of replication-deficient recombinant adenoviruses in bacteria for hepatic fibrosis gene therapy |
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| LIN Yong ,XIE Wei Fen ,ZHANG Zhong Bing ,CHEN Wei Zhong ,ZHANG Xin ,ZENG Xin ,CHEN Yue Xiang. Rapid construction of 2 kinds of replication-deficient recombinant adenoviruses in bacteria for hepatic fibrosis gene therapy[J]. Former Academic Journal of Second Military Medical University, 2003, 24(6): 654-657 | |
| Authors: | LIN Yong XIE Wei Fen ZHANG Zhong Bing CHEN Wei Zhong ZHANG Xin ZENG Xin CHEN Yue Xiang |
| Affiliation: | LIN Yong 1*,XIE Wei Fen 1,ZHANG Zhong Bing 1,CHEN Wei Zhong 1,ZHANG Xin 2,ZENG Xin 1,CHEN Yue Xiang 1 |
| Abstract: | |
| Keywords: | replication deficient recombinant adenovirus homologous recombination gene therapy hepatic fibrosis |
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