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小鼠胚胎干细胞饲养层制备条件的研究
引用本文:王璐,王亚平. 小鼠胚胎干细胞饲养层制备条件的研究[J]. 重庆医科大学学报, 2008, 33(1): 77-81
作者姓名:王璐  王亚平
作者单位:重庆医科大学基础医学院组织胚胎学教研室,重庆,400016;重庆医科大学基础医学院组织胚胎学教研室,重庆,400016
基金项目:教育部高等学校博士学科点专项科研基金
摘    要:
目的:建立稳定高效的小鼠胚胎成纤维细胞饲养层培养体系,用于分离克隆胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ES细胞).方法:取妊娠13.5~14.5d的胎鼠,采用组织消化法结合组织块培养法分离、培养小鼠成纤维细胞;MTT法测定细胞生长曲线,结合倒置显微镜观察筛选小鼠成纤维细胞饲养层的最佳种植密度;MTT法筛选丝裂霉素c作用的最佳浓度和时间.取妊娠3.5d的小鼠囊胚在经丝裂霉素C处理的饲养层上培养,观察胚胎干细胞生长情况.结果:组织消化法结合组织块培养法是分离培养小鼠成纤维细胞的较好的方法;1 × 105~2×105个/ml种植密度适于饲养层铺板;丝裂霉素c 10μg/ml作用3.5h或20μg/ml作用2.5h能抑制成纤维细胞增殖,细胞至少在7d内维持稳定的水平;妊娠3.5d小鼠囊胚在饲养层上培养能形成Es集落.结论:制备的胎鼠成纤维细胞饲养层能有效地支持小鼠胚胎干细胞的生长.

关 键 词:胚胎干细胞  饲养层  胚胎成纤维细胞  小鼠
文章编号:0253-3626(2008)01-0077-05
收稿时间:2007-05-17
修稿时间:2007-05-17

Study on the preparation of mouse embryonic stem cell feeder layer
WANG Lu. Study on the preparation of mouse embryonic stem cell feeder layer[J]. Journal of Chongqing Medical University, 2008, 33(1): 77-81
Authors:WANG Lu
Abstract:
Keywords:Embryonic stem cell    Feeder layer   Embryonic fibroblast   Mouse
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