Rabex-5基因RNAi慢病毒表达载体的构建及其在MCF-7中对Rabex-5表达的影响

目的：构建Rabex-5RNAi慢病毒表达载体,并转染人乳腺癌细胞株MCF-7,观察其对Rabex-5基因的沉默效应。方法：将设计合成的单链引物退火成双链oligo序列,连接入经AgeⅠ和EcoRⅠ双酶切线性化的pMAGic慢病毒质粒载体中,经转化DH5?琢感受态细胞并筛选出阳性克隆,测序鉴定。用293FT细胞包装产生慢病毒,感染MCF-7细胞,利用Real-timePCR和Westernblot鉴定抑制Rabex-5表达的效果。结果：PCR与测序鉴定证实成功构建了Rabex-5RNAi的慢病毒载体,转染MCF-7细胞后,与未干扰组和阴性对照组相比,Rabex-5的mRNA和蛋白表达下调,以RNAi3的沉默效应最佳。结论：成功构建了Rabex-5RNAi慢病毒表达载体,其可使MCF-7细胞株Rabex-5表达下调,为进一步研究靶向Rabex-5RNAi对乳腺癌细胞恶性生物学行为变化及基因治疗研究奠定了实验基础。