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| PTEN重组腺病毒载体的构建及其在气道平滑肌细胞的表达 | |
| 引用本文： | 钟浩海,罗雅玲,赖文岩,徐健,陈丽丽,叶涵. PTEN重组腺病毒载体的构建及其在气道平滑肌细胞的表达[J]. 南方医科大学学报, 2009, 29(5): 859 |
| 作者姓名： | 钟浩海 罗雅玲 赖文岩 徐健 陈丽丽 叶涵 |
| 作者单位： | 1. 南方医科大学南方医院,呼吸内科,广东,广州,510515 2. 南方医科大学南方医院,心内科实验室,广东,广州,510515 3. 南方医科大学南方医院,肾移植科,广东,广州,510515 |
| 摘 要： | 目的 应用pAdxsi载体系统构建携带PTEN基因的腺病毒载体.方法 将PTEN cDNA自载体pcDNA3-PTEN中切出,克隆至穿梭质粒pShuttle-GFP-CMV中,然后与腺病毒质粒pAdxsi在化学感受态细胞DH5α菌株内同源重组,经Pac-Ⅰ线性化后,重组子通过脂质体2000介导转染HEK293细胞,产生有感染能力的腺病毒,并测定其滴度,通过荧光显微镜能观察HEK293细胞内绿色荧光的表达;PCR检测腺病毒载体PTEN mRNA的表达,Western blotting检测PTEN蛋白在气道平滑肌细胞的表达.结果 感染腺病毒载体的HEK293细胞表达GFP随着时间逐渐增强,并且出现明显的细胞病变效应,经过3轮扩增后病毒达到合适的滴度,构建的Ad-PTEN腺病毒滴度为2×1010pfu/ml,PCR扩增后经琼脂糖凝胶电泳证实其表达,Western blotting检测纠腺病毒感染的气道平滑肌细胞内PTEN蛋白表达明显增高.结论 成功构建了携带野生型PTEN腺病毒载体,为进一步研究PTEN基因应用于哮喘治疗提供了实验基础. |
| 关 键 词： | 腺病毒载体 气道平滑肌细胞 哮喘 |
Construction of a recombinant adenovirus vector containing PTEN and its expression in airway smooth muscle cells |
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| ZHONG Hao-hai,LUO Ya-ling,LAI Wen-yan,XU Jian,CHEN Li-li,YE Han. Construction of a recombinant adenovirus vector containing PTEN and its expression in airway smooth muscle cells[J]. Journal of Southern Medical University, 2009, 29(5): 859 | |
| Authors: | ZHONG Hao-hai LUO Ya-ling LAI Wen-yan XU Jian CHEN Li-li YE Han |
| Affiliation: | ZHONG Hao-hai1,LUO Ya-ling1,LAI Wen-yan2,XU Jian3,CHEN Li-li1,YE Han1 1Department of Respiratory Diseases,2Laboratory of Cardiovascular Diseases,3Department of Kidney Transplantation,Nanfang Hospital,Southern Medical University,Guangzhou 510515,China |
| Abstract: | |
| Keywords: | PTEN |
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