| 小鼠B7-1 基因RNAi 慢病毒载体的构建及其沉默效应研究 |
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| 引用本文： | 孔 永 沈立军 王 婧 朱 莹 蔡 磊 邱玉华 黄 莉. 小鼠B7-1 基因RNAi 慢病毒载体的构建及其沉默效应研究[J]. 中国免疫学杂志, 2016, 32(9): 1327 |
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| 作者姓名： | 孔 永 沈立军 王 婧 朱 莹 蔡 磊 邱玉华 黄 莉 |
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| 摘 要： | 目的:构建介导小鼠B7-1 基因RNAi 的慢病毒载体,研究其对L929 细胞表面B7-1 分子表达的沉默效应。方法:从小鼠B7-1 基因编码区选择3 段RNA 干扰靶序列,制备转录双发夹RNA 的前体DNA,并克隆至慢病毒穿梭质粒,构建B7-1 的RNAi 慢病毒穿梭载体,测序鉴定。将重组质粒及辅助质粒共转染293T 细胞产生慢病毒,经超速离心获得浓缩慢病毒颗粒。通过测定293T 细胞GFP 表达水平确定病毒滴度,流式细胞术检测感染效率以及对细胞表面B7-1 的干扰效率。病毒感染细胞经嘌呤霉素筛选及克隆培养获得小鼠B7-1 基因RNAi 慢病毒稳定感染的L929 细胞,流式细胞术分析细胞中GFP 及B7-1 分子表达的状况;将感染细胞与分离的小鼠脾脏T 细胞混合培养,分析B7-1 稳定沉默细胞刺激T 细胞增殖的能力。结果:成功了构建小鼠B7-1 基因RNA 干扰的重组慢病毒载体;获得了滴度达(3 ~ 5) 108 TU/ ml 的浓缩重组慢病毒,重组慢病毒可有效感染L929 细胞介导GFP 表达以及沉默其表面的B7-1。经筛选获得慢病毒稳定感染的L929 细胞,该细胞表面B7-1分子表达受到抑制,刺激T 细胞增殖的能力显著下降(P<0.05)。结论:构建了能够高效感染及沉默小鼠B7-1 分子的RNAi 慢病毒载体,该载体可稳定沉默L929 细胞表面B7-1 分子表达,抑制B7-1/ CD28 信号诱导的T 细胞增殖效应。
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| 关 键 词： | B7-1 RNAi 慢病毒 共刺激信号 L929 |
Construction of lentiviral vector specific for mouse B7-1 gene interference and study on silencing effects induced by lentivirus-mediated B7-1 RNAi |
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