利用CHO（dhfr^—）细胞高效表达GM—CSF／Feγ2^—融合蛋白

目的 利用二氢叶酸还原酶缺陷型细胞CHO（dhfr-)高效表达融合蛋白GM－CSF／Feγ2^-。方法 利用脂质体基因转染技术，把含有融合基因GM－CSF／Feγ2^-的真核表达质粒pRc/CMV2/GM-CSF/Feγ2^-和含有二氢叶酸还原酶基因的真核表达质粒pSV2-dhfr共转洒二氢叶酸还原酶缺陷型细胞CHO（dhfr-)中。用G418和撤除H、T（次黄嘌呤、胸腺嘧啶核苷)双筛选，获得dhfr neo 双表型阳性的细胞克隆。取表达产量最高的克隆进行亚克隆，并行MTX加压筛选，以提高表达量。用RT－PCR、ELISA和Western blot对表达产物进行鉴定并行MTT法检测表达蛋白的生物学活性。结果 成功地表达出了具有GM－CSF生物学活性的融合蛋白GM－CSF／Feγ2^-。结论 该方法可行，表达量达到15μg/ml。