胃癌细胞系中甲基化与叶酸干预对多种基因的调控研究

目的：胃癌的发生从分子发病水平上说是一个涉及多种癌基因、抑癌基因、凋亡相关基因等的异常和积累的多步骤的过程。DNA甲基化在基因表达中起调控作用已成为共识[1]。各种肿瘤的发生过程中有癌基因的低甲基化和抑癌基因的高甲基化，因为甲基化程度与基因表达呈负相关，所以引起抑癌基因的表达减弱或缺失及癌基因的表达增强。5-氮脱氧胞苷（5-aza-2’-deoxycytidine, 5-aza-dC）通过抑制甲基化酶使基因去甲基化，通过5-aza-dC干预能够观察甲基化对基因表达的影响。胃癌发生中也有抑癌基因的高甲基化及癌基因的低甲基化现象，但是迄今为止未见同时研究同一细胞系的多种基因的甲基化对基因表达和细胞周期的影响。本研究对此作了有益的探讨，以期为以后的胃肠道肿瘤的治疗提供分子水平的依据。本文主要探讨不同分化的胃癌细胞系在不同浓度的5-氮脱氧胞苷（5-aza-2’-deoxycytidine, 5-aza-dC）和甲基化食物供体叶酸的化学干预下癌基因、抑癌基因和与凋亡有关的基因与甲基化调控的关系。方法： 培养高分化、中分化和未分化的胃癌细胞MKN－45、MKN－28、HGC－27，分别以不同浓度的5-aza-dC干预细胞，以同一浓度的叶酸干预细胞，部分细胞48小时后再以不同浓度的5-aza-dC干预。提取细胞的RNA，用RT-PCR的方法检测p16INK4A、p21WAF1、p73、c-myc、c-Ha-ras等多种基因的表达情况。结果：在不同分化的三种胃癌细胞中基因表达受甲基化调控的程度也不同。抑癌基因中p16INK4A在干预前MKN－45和HGC－27细胞表达，而在用5-aza-dC干预后表达增强，且不同的胃癌细胞株表达增强与5-aza-dC干预的时间与浓度不同有关，p21WAF1、p73没有明显变化；癌基因中的c-myc、c-Ha-ras变化不明显；所有胃癌细胞系中叶酸干预及叶酸联合5-aza-dC干预前后所以基因的mRNA表达没有明显变化。结论：不同分化人胃癌细胞中，甲基化修饰对癌基因、抑癌基因、与凋亡有关的基因的调控差异明显。其中的机制研究是否与个体差异有关。但是在肿瘤细胞中的叶酸干预后对甲基化的调控不敏感，可能是因为肿瘤细胞对叶酸的甲基化供体已经不起作用，与癌前病变补充叶酸不同。

Regulation of DNA methylation and folate on expression of genes in human gastric cancer cell lines.