| 丙型肝炎病毒E2蛋白作为酵母双杂交体系饵载体的构建及表达 |
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| 引用本文： | 梁庆华,蒋栋,谢尧,范涛,陶其敏. 丙型肝炎病毒E2蛋白作为酵母双杂交体系饵载体的构建及表达[J]. 北京大学学报(医学版), 2000, 32(2) |
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| 作者姓名： | 梁庆华 蒋栋 谢尧 范涛 陶其敏 |
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| 作者单位： | 北京医科大学人民医院肝病研究所,北京,100044;北京医科大学人民医院肝病研究所,北京,100044;北京医科大学人民医院肝病研究所,北京,100044;北京医科大学人民医院肝病研究所,北京,100044;北京医科大学人民医院肝病研究所,北京,100044 |
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| 摘 要： | 目的 :用丙型肝炎 (丙肝 )病毒 (hepatitisCvirus,HCV)胞膜蛋白 2 (envelopeprotein 2 ,E2 )胞外区片段 ,构建酵母双杂交体系中“饵”载体 ,明确其在酵母细胞中的表达 ,排除自身激活作用 ,验证其能否用于酵母双杂交体系筛选cDNA文库。方法 :设计引物 ,从本室构建的含中国株Ⅲ型HCVE2片段的载体上 ,扩增出不包含C末端跨膜区的E2片段E2 6 6 1,经EcoRI和PstI双酶切后 ,克隆到酵母双杂交的“饵”载体pAS2 1质粒上 ,构建成载体pAS2 1 E2 6 6 1。阳性克隆经EcoRI和PstI双酶切鉴定后 ,转入酵母中 ,用酵母蛋白抽提物作Western杂交 ,证实其表达 ;滤膜印记杂交验证其有无自身激活作用。结果 :所构建的载体 pAS2 1 E2 6 6 1双酶切后 ,片段大小正确 ;转入酵母后 ,提取酵母质粒 ,PCR扩增出预期大小的片段 ,Western杂交出现阳性条带 ;滤膜杂交 ,转有 pAS2 1 E2 6 6 1和阴性对照pLAM5 ' 1的酵母菌落没有激活报告基因 ,而GAL4全长的阳性对照菌落变为蓝色。结论 :含有HCVE2 6 6 1的“饵”载体构建正确 ,在酵母细胞中能表达出E2蛋白 ,并且没有自身激活报告基因的功能 ,能够应用于酵母双杂交体系。
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| 关 键 词： | 肝炎病毒 丙型 病毒包膜蛋白质类 载体蛋白质类 |
Construction and expression of bait plasmid with hepatitis C virus E2 protein in yeast two-hybrid system |
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| LIANG Qing-Hua,JIANG Dong,XIE Yao,FAN Tao,TAO Qi-Min. Construction and expression of bait plasmid with hepatitis C virus E2 protein in yeast two-hybrid system[J]. Journal of Peking University. Health sciences, 2000, 32(2) |
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| Authors: | LIANG Qing-Hua JIANG Dong XIE Yao FAN Tao TAO Qi-Min |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Hepatitis C viruses Viral envelope proteins Carrier proteins |
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