| PSNAV2.0-TNFα重组质粒的构建及其在体外的表达 |
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| 引用本文： | 高宇红,薛毅珑,刘建伟,崔忻.PSNAV2.0-TNFα重组质粒的构建及其在体外的表达[J].中国组织工程研究与临床康复,2007,11(42):8528-8531. |
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| 作者姓名： | 高宇红 薛毅珑 刘建伟 崔忻 |
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| 作者单位： | 解放军总医院老年医学研究所细胞生物学研究室,北京市,100853 |
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| 摘 要： | 目的:在前期微囊化基因工程细胞制备平台的基础上,构建分泌型人肿瘤坏死因子α的真核表达载体PSNAV2.0-TNFα重组质粒,并鉴定其蛋白的体外瞬时表达,为进一步利用该基因进行微囊化细胞移植治疗和改善疾病奠定基础。方法:实验于2006-06/2007-05在解放军总医院老年医学研究所细胞生物学实验室完成。①以含有人肿瘤坏死因子αcDNA序列的质粒为模板,通过PCR扩增获得人肿瘤坏死因子α基因片段;将其定向插入真核表达载体PSNAV2.0中,获得重组质粒PSNAV2.0-TNFα。采用SalⅠ和EcoRⅠ双酶切法、PCR法及插入片段序列测定法鉴定该质粒。②利用阳离子脂质体介导法,将其转染到人胚胎肾细胞HEK-293细胞中,构建可持续分泌人肿瘤坏死因子α的基因工程细胞,采用RT-PCR法和Western blot法检测转染细胞培养上清液中人肿瘤坏死因子蛋白的体外瞬时表达。结果:①通过SalⅠ和EcoRⅠ双酶切、PCR及测序鉴定证明:在HEK-293中插入片段正确。②采用RT-PCR和Western blot法检测表明HEK-293细胞培养上清中有人肿瘤坏死因子α蛋白,Mr17000。结论:成功构建了重组质粒PSNAV2.0-TNFα真核表达载体,转染HEK-293细胞后可有效分泌人肿瘤坏死因子α蛋白,并能分泌到细胞外。
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| 关 键 词： | 人肿瘤坏死因子α 真核表达载体 人胚胎肾细胞HEK-293 |
| 文章编号： | 1673-8225（2007）42-08528-04 |
| 修稿时间： | 2007-06-11 |
Construction and transient protein expression of PSNAV2.0-TNF alfa recombined plasmids in vitro |
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| Gao YH,Xue YL,Liu JW,Cui X.Construction and transient protein expression of PSNAV2.0-TNF alfa recombined plasmids in vitro[J].Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research,2007,11(42):8528-8531. |
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| Authors: | Gao YH Xue YL Liu JW Cui X |
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| Institution: | Cytobiology Laboratory, Institute of Gerontology, General Hospital of Chinese PLA, Beijing 100853, China |
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