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| hBDNF-GFP基因转染神经干细胞后hBDNF的表达及生物学特性研究 | |
| 引用本文： | 冯东福,刘勇,陈二涛,汪洋,刘天津. hBDNF-GFP基因转染神经干细胞后hBDNF的表达及生物学特性研究[J]. 中华神经医学杂志, 2009, 8(8). DOI: 10.3760/cma.j.issn.1671-8925.2009.08.008 |
| 作者姓名： | 冯东福 刘勇 陈二涛 汪洋 刘天津 |
| 作者单位： | 1. 上海交通大学医学院附属第三人民医院神经外科,上海,201900 2. 复旦大学上海医学院解剖与组织胚胎学系,上海,200025 3. 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所,上海,200025 |
| 基金项目： | 上海市教委自然科学基金重点项目 |
| 摘 要： | 目的 探讨慢病毒载体介导入脑源性神经营养因子(hBDNF)和绿色荧光蛋白(GFP)基因转染大鼠神经干细胞(NSCs)后hBDNF的表达及其生物学特性的变化.方法 构建hBDNF和GFP基因共表达的慢病毒载体并转染NSCs(hBDNF-GFP-NSCs组),同时设GFP转染NSCs组(GFP-NSCs组)和未转染的NSCs组(NSCs组).应用RT-PCR和Western blot法分别检测3组细胞中hBDNFmRNA和蛋白的表达:ELISA检测hBDNF-GFP-NSCs组细胞转染前后培养液中hBDNF含量的变化:使用上述3组细胞的上清液培养背根神经节(DRG)与NSCs,观察DRG的生长情况并应用流式细胞法检测NSCs分化为神经元的比例.结果 RT-PCR、Western blot结果显示转染后7 d hBDNF-GFP-NSCs组hBDNF mRNA和蛋白的表达均明显强于GFp-NSCs组和NSCs组;EUSA检测显示hBDNF-GFP转染NSCs后上清中hBDNF含量增加,第5天分泌达最高峰,与转染前比较差异均有统计学意义(P<0.05);使用hBDNF-GFP-NSCs组上清液培养DRG和NSCs,4 d后DRG很快伸出突起,流式细胞法检测显示NSCs分化为神经元的比例高于其他两组.结论 NSCs可作为基因转染载体,被hBDNF-GFP基因重组慢病毒转染后仍可保持原有生物学特性,并稳定表达和分泌有生物学活性的hBDNF和GFP. |
| 关 键 词： | 神经干细胞 脑源性神经营养因子 绿色荧光蛋白 基因转染 |
Biological characteristics of rat neural stem cells transfected with human brain-derived neurotrophic factor and green fluorescent protein genes |
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| FENG Dong-fu,LIU Yong,CHEN Er-tao,WANG Yang,LIU Tian-jin. Biological characteristics of rat neural stem cells transfected with human brain-derived neurotrophic factor and green fluorescent protein genes[J]. Chinese Journal of Neuromedicine, 2009, 8(8). DOI: 10.3760/cma.j.issn.1671-8925.2009.08.008 | |
| Authors: | FENG Dong-fu LIU Yong CHEN Er-tao WANG Yang LIU Tian-jin |
| Abstract: | |
| Keywords: | Stem cells Brain derived neurotrophic factor Green fluorescent protein Gene transfection |
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