| 抗AIF单链抗体的构建与高效表达 |
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| 引用本文： | 艾洪武,郭军庆,游上游.抗AIF单链抗体的构建与高效表达[J].免疫学杂志,2005,21(6):535-539. |
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| 作者姓名： | 艾洪武 郭军庆 游上游 |
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| 作者单位： | 武汉市儿童医院检验部,武汉,430016;武汉市儿童医院检验部,武汉,430016;武汉市儿童医院检验部,武汉,430016 |
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| 摘 要： | 目的获得具有生物活性的抗酸性同功铁蛋白(AIF)单链抗体。方法利用重组噬菌体抗体库技术从杂交瘤细胞4c9中分别克隆小鼠抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因,成功构建AIF4c9scFv基因,并将其亚克隆于原核表达载体pET28a,转化E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导表达。表达产物经镍鏊合层析柱复性后,用ELISA和Westernblotting检测表达蛋白与AIF的结合特性。结果AIF4c9scFv表达蛋白在细胞质中主要以不溶性包涵体形式存在,优化后的柱内复性程序可从高浓度的包涵体变性蛋白中高效复性AIF4c9scFv表达蛋白,其回收率可达75%左右。AIF4c9scFv复性蛋白可特异识别AIF抗原,具有良好的AIF抗体活性,其亲和力常数(KDscFv)为7.29×10-8mol/L。表达菌体的功能性AIF4c9scFv抗体产量约为62mg/L。结论在大肠杆菌中高效表达的抗AIFScfv经柱内复性后具有较好的生物学活性。
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| 关 键 词： | 酸性同功铁蛋白 单链抗体 包涵体 柱内复性 |
| 文章编号： | 1000-8861（2005）06-0535-05 |
| 收稿时间： | 2004-09-06 |
| 修稿时间： | 2004-11-22 |
Construction and expression of a single-chain Fv antibody fragment against acidic isoferritin in Escherichia coli |
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| AI Hong-wu,GUO Jun-qin,YOU Shang-you.Construction and expression of a single-chain Fv antibody fragment against acidic isoferritin in Escherichia coli[J].Immunological Journal,2005,21(6):535-539. |
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| Authors: | AI Hong-wu GUO Jun-qin YOU Shang-you |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Acidic isoferrifin scFv Inclusion body On-column refolding |
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