人脐带来源间充质干细胞分离培养方法的优化

背景：关于人脐带间充质干细胞的分离培养方法不一，如何提高人脐带来源间充质干细胞获得效率的问题尚未解决。目的：优选人脐带来源间充质干细胞制备的消化酶组分。方法：无菌条件下取正常足月剖腹产的脐带近胎儿段，按不同混合酶浓度比值划分为3组，混合酶Ⅰ组成分为0.4%Ⅱ型胶原酶、0.1%胰酶、0.02%EDTA和0.1%透明质酸酶；混合酶Ⅱ组成分为0.1%Ⅱ型胶原酶、0.4%胰酶、0.02%EDTA和0.1%透明质酸酶；混合酶Ⅲ组成分为0.3%Ⅱ型胶原酶、0.1%胰酶、0.02%EDTA、0.1%透明质酸酶和0.1%DNA酶。每组再按消化时间分为1，2，3 h 3个亚组。最后重悬细胞终体积均定位4 mL并计数，采用含血清的DMEM培养液体外培养细胞。结果与结论：采用3种不同混合酶浓度进行消化，发现相同消化时间内，混合酶Ⅲ组消化细胞最多(P < 0.05)。在作用3 h时，混合酶Ⅲ组获取的细胞中活细胞比值显著低于混合酶Ⅰ组和混合酶Ⅱ组(P < 0.01)。提示0.3%Ⅱ型胶原酶、0.1%胰酶、0.02%EDTA、0.1%透明质酸酶和0.1%DNA酶混合液消化脐带组织块2 h为获取脐带间充质干细胞的最佳条件。

Optimized study on isolation and cultivation of human umbilical cord mesenchymal stem cells