miR-16-5p通过靶向YWHAQ调控乳腺癌耐药细胞的凋亡与迁移能力

目的探究miR-16-5p对乳腺癌紫杉醇耐药细胞生物学活性的影响及分子机制。方法以人乳腺癌亲本细胞（SKBR-3）与乳腺癌紫杉醇耐药细胞（SKBR-3/PR）为研究对象。实验设空白对照组、阴性对照组、miR-16-5p类似物组（miR-16-5p mimics）、miR-16-5p抑制剂组（miR-16-5p inhibitor），YWHAQ干扰组（si-YWHAQ），以及联合组（miR-16-5p mimics+si-YWHAQ）。利用qRT-PCR检测乳腺癌组织与癌旁组织、SKBR-3与SKBR-3/PR间miR-16-5p的表达水平。使用生信数据对miR-16-5p的靶基因做预测，双荧光素酶实验验证靶向结合。免疫印迹检测细胞YWHAQ、Bcl-2和Bax表达。CCK-8和Transwell检测细胞增殖迁移能力。流式细胞术检测耐药细胞周期凋亡改变。结果qRT-PCR显示乳腺癌组织中miR-16-5p水平低于癌旁组织（-1.19± 1.90 vs 1.59±1.76，P < 0.01）。生物信息预测YWHAQ是miR-16-5p的靶基因，荧光素酶实验证实miR-16-5p能够靶向调节YWHAQ（P < 0.01）。相对于SKBR-3细胞，SKBR-3/PR细胞中miR-16-5p表达水平降低（P < 0.01），YWHAQ表达水平增高（P < 0.05）。Western blot结果显示miR-16-5p类似物能够抑制YWHAQ表达，miR-16-5p抑制剂能够促进YWHAQ表达（P < 0.01）。相对于对照组，miR-16-5p类似物能够将耐药细胞阻滞在G0/G1期（[55.61±1.99）% vs（43.06±1.53）%，P < 0.01]，抑制细胞增殖和迁移能力（P < 0.01），促进细胞凋亡（[10.37±0.23）% vs（3.81±0.88）%，P < 0.01]，YWHAQ干扰组细胞迁移能力下降，凋亡率升高，miR-16-5p类似物组与YWHAQ干扰组细胞的Bax蛋白表达增加，YWHAQ与Bcl-2蛋白水平降低。相对于miR-16-5p类似物组，联合组细胞迁移能力被抑制（75.75±29.85 vs 181.11±11.71，P < 0.01），凋亡率显著升高（[24.20±2.43）% vs（14.10±4.47）%，P < 0.01]。结论miR-16-5p能够通过靶向调节YWHAQ调控Bcl-2/Bax的表达，从而改变乳腺癌紫杉醇耐药细胞的生物学活性。