| 延胡索酰乙酰乙酸水解酶基因敲除大鼠胚胎干细胞株的建立 |
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| 引用本文： | 叶真龙,王艳,金华君,刘韬,钱其军.延胡索酰乙酰乙酸水解酶基因敲除大鼠胚胎干细胞株的建立[J].中国组织工程研究与临床康复,2013,0(1):50-55. |
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| 作者姓名： | 叶真龙 王艳 金华君 刘韬 钱其军 |
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| 作者单位： | 叶真龙 (浙江理工大学生命科学学院新元医学与生物技术研究所,浙江省杭州市 310018)；王艳 (解放军第二军医大学东方肝胆医院病毒基因治疗实验室,上海市 200438)； 金华君 (解放军第二军医大学东方肝胆医院病毒基因治疗实验室,上海市 200438)； 刘韬 (解放军第二军医大学东方肝胆医院病毒基因治疗实验室,上海市 200438)； 钱其军 (浙江理工大学生命科学学院新元医学与生物技术研究所,浙江省杭州市 310018)； |
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| 摘 要： | 背景:小鼠肝损伤模型已被广泛应用,大鼠肝损伤模型能在发病机制,肝移植环境等方面更好地模拟人,建立大鼠延胡索酰乙酰乙酸水解酶(fuarylacetoacetat hydrolase,Fah)基因敲除的胚胎干细胞株是大鼠肝损伤模型建立的重点和难点。目的:建立Fah基因缺失的大鼠胚胎干细胞株。方法:根据Genbank检索出的大鼠Fah基因序列构建带有正负双向筛选系统的Fah基因敲除载体pKO-Fah,并进行大鼠胚胎干细胞制备与培养,通过电穿孔转染将线性化质粒转入大鼠胚胎干细胞中,用嘌呤霉素和增强型绿色荧光进行克隆的筛选,再对筛选出来的阳性克隆进行PCR验证。结果与结论:电穿孔转染后观察到绿荧光胚胎干细胞克隆,经过3轮嘌呤霉素药物筛选后约有90%的胚胎干细胞克隆表达绿荧光,成功挑取到2个稳定表达绿荧光的胚胎干细胞克隆,重组胚胎干细胞-Fah,通过PCR鉴定为正确同源重组的阳性克隆。提示大鼠胚胎干细胞稳定建系后,能通过传统的同源重组方法来建立基因敲除胚胎干细胞,并为后期基因敲除动物的建立奠定基础。
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| 关 键 词： | 干细胞 胚胎干细胞 基因敲除 同源重组 Fah基因 大鼠 干细胞图片文章 |
Establishment of fumarylacetoacetate hydrolase gene knockout rat embryonic stem cell strains |
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| Ye Zhen-long,Wang Yan,Jin Hua-jun,Liu Tao,Qian Qi-jun.Establishment of fumarylacetoacetate hydrolase gene knockout rat embryonic stem cell strains[J].Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research,2013,0(1):50-55. |
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| Authors: | Ye Zhen-long Wang Yan Jin Hua-jun Liu Tao Qian Qi-jun |
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| Institution: | 1,2 1 Xinyuan Institute of Medicine and Biotechnology, College of Life Science, Zhejiang Sci-Tech University, Hangzhou 310018, Zhejiang Province, China 2 Laboratory of Viral and Gene Therapy, Eastern Hepatobiliary Surgery Hospital, Second Military Medical University of Chinese PLA, Shanghai 200438, China |
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