| 柴胡ISSR—PCR反应体系的建立与优化 |
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| 引用本文： | 隋春,魏建和,陈士林,杨新全,杨成民.柴胡ISSR—PCR反应体系的建立与优化[J].时珍国医国药,2008,19(8). |
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| 作者姓名： | 隋春 魏建和 陈士林 杨新全 杨成民 |
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| 作者单位： | 1. 中国医学科学院·中国协和医科大学药用植物研究所,北京,100094
2. 中国医学科学院·中国协和医科大学药用植物研究所海南分所,海南,兴隆,571533 |
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| 基金项目： | 国家科技支撑计划重点项目，国家中医药管理局科技专项基金，北京市科技新星计划项目 |
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| 摘 要： | 目的建立适于柴胡ISSR分析的PCR反应体系；筛选适宜引物，并确定最佳退火温度。方法CTAB法提取叶片DNA，通过单因子实验分别找出合适的ISSR-PCR反应条件，利用梯度PCR确定引物最佳退火温度。结果适于柴胡ISSR分析的PCR反应体系为25μl总体积中含有1×Taq酶缓冲液，2．0mmol／L MgCl2，各0．15mmol／L的dNTPs，0．3μmol／L引物，1．5U Taq酶（上海生工），20ng模板DNA，2％去离子甲酰胺。在100条引物中筛选出30条扩增条带清晰且条带数目较多的引物，最佳退火温度为49．9～63．6℃（因引物不同而异）。结论建立了柴胡ISSR—PCR反应体系，筛选出30条引物并确定了最佳退火温度，为应用ISSR技术鉴定柴胡种质资源、分子标记辅助选择育种及其遗传多样性研究奠定了基础。
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| 关 键 词： | 柴胡 基因组DNA提取 ISSR—PCR |
Establishment and Optimization of ISSR-PCR Reaction System for Bupleurum chinense DC. |
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| SUI Chun,WEI Jian-he,CHEN Shi-lin,YANG Xin-quan,YANG Cheng-min.Establishment and Optimization of ISSR-PCR Reaction System for Bupleurum chinense DC.[J].Lishizhen Medicine and Materia Medica Research,2008,19(8). |
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| Authors: | SUI Chun WEI Jian-he CHEN Shi-lin YANG Xin-quan YANG Cheng-min |
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