| 靶向MTDH的小干扰RNA对人原发性肝癌细胞HepG2骨架重排的影响 |
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| 引用本文： | 周珍珍,邓欢,黄焕军,夏羽佳,涂炜,何嘉怡,田德安.靶向MTDH的小干扰RNA对人原发性肝癌细胞HepG2骨架重排的影响[J].胃肠病学和肝病学杂志,2013,22(6):545-548. |
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| 作者姓名： | 周珍珍 邓欢 黄焕军 夏羽佳 涂炜 何嘉怡 田德安 |
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| 作者单位： | 周珍珍 (华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科,湖北,武汉,430030)； 邓欢 (华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科,湖北,武汉,430030)； 黄焕军 (华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科,湖北,武汉,430030)； 夏羽佳 (华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科,湖北,武汉,430030)； 涂炜 (华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科,湖北,武汉,430030)； 何嘉怡 (华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科,湖北,武汉,430030)； 田德安 (华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科,湖北,武汉,430030)； |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(项目编号：81070333),国家自然科学基金资助项目(项目编号：81000928),湖北省自然科学基金(项目编号：2009CDB177) |
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| 摘 要： | 目的构建人MTDH基因的shRNA干扰载体,并观察其对原发性肝癌细胞HepG2骨架重排的影响。方法针对MTDH基因的不同部位设计3对shRNA的寡核苷酸片段,克隆到载体pGCsilencerTM H1/Neo中,RT-PCR、Western blotting及免疫荧光检测转染后MTDH mRNA和蛋白表达变化情况,并筛选最佳抑制效率的shRNA干扰载体,并将其转染人原发性肝癌细胞HepG2,用罗丹明标记的鬼笔环肽显示沉默MTDH基因后对人原发性肝癌细胞HepG2骨架蛋白F_actin的改变。结果靶向MTDH干扰质粒构建成功。与转空载体的阴性对照组及未转染组比较,转染pGCsilencerTM H1/Neo-MTDH-shRNA后,HepG2中MTDH mRNA和蛋白表达明显降低,其中以pGCsilencerTM H1/Neo-MTDH-S1最为明显,达到90%以上;细胞形态及细胞骨架显示转染pGCsilencerTMH1/Neo-MTDH-S1的细胞骨架蛋白F_actin发生重排。结论成功构建并筛选最佳抑制效率的靶向MTDH干扰pGCsilencerTM H1/Neo-MTDH-S1,该载体能有效重排肝癌细胞骨架。
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| 关 键 词： | 肝细胞癌 MTDH 骨架重排 小干扰RNA HepG2 |
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