| 人前列腺特异性抗原mRNA实时荧光POR定量标准品的构建 |
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| 引用本文： | 柯峰,吴健民,贺竹泉,王宇学.人前列腺特异性抗原mRNA实时荧光POR定量标准品的构建[J].华中医学杂志,2005,29(5):387-389,F0004. |
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| 作者姓名： | 柯峰 吴健民 贺竹泉 王宇学 |
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| 作者单位： | [1]华中科技大学同济医学院,武汉430030 [2]武汉三九生物制品公司,武汉430000 [3]湖北中医学院检验系,武汉430061 |
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| 摘 要： | 目的 构建实时荧光定量PCR（FQ-PCR）的标准品以定量检测人前列腺特异性抗原（PSA）mRNA的表达。方法 以Trizol裂解抽提法提取LNcaP细胞的总RNA。以RT-PCR法制备PSAcDNA目的片段并进行扩增；以A-T载体克隆法制备重组质粒，并转化EcoliDH5。菌提取重组质粒，联合用氨苄青霉素筛选法和筛选法、EcoRI限制性酶切和序列分析法鉴定特异性重组质粒。用聚乙二醇沉淀法提纯质粒并检测）．260nm吸光度，确定原液的重组质粒的拷贝浓度并以此制备FQPCR梯度标准品。结果 PSAcDNA目的片段成功制备并获得稳定的重组质粒。保持了目的片段的特异性和序列的完整性。结论 成功构建了实时荧光定量PCR标准品。
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| 关 键 词： | 聚合酶链反应 人前列腺特异抗原 构建 mRNA POR定量标准品 |
| 收稿时间： | 2005-04-01 |
| 修稿时间： | 2005-04-01 |
Construction of the standards for detecting human prostate specific antigen mRNA with real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction. |
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| Ke Feng , Wu j ianmin , He Zhuquan et al..Construction of the standards for detecting human prostate specific antigen mRNA with real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction.[J].Central China Medical Journal,2005,29(5):387-389,F0004. |
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| Authors: | Ke Feng Wu j ianmin He Zhuquan |
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| Institution: | 1Tongji Medical College of Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Polymerase chain reaction Human prostate specific antigen mRNA Standards Construction |
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