| 摘 要： | 目的:研究刺山柑果实提取物对四氯化碳(CCl_4)诱导的小鼠肝纤维化的保护作用及可能机制。方法:45只C57BL小鼠随机分为正常组、模型组、扶正化瘀方组(FZHY组,4 g/kg)、刺山柑低剂量组(0.93 g/kg)和高剂量组(2.80 g/kg),每组9只。除正常组外,其余各组小鼠腹腔注射10%CCl_4,每次2 ml/kg,每周3次,连续8周,诱导小鼠实验性肝纤维化模型。造模第5周起,各药物组灌胃给予相应剂量的药液,连续4周。末次给药后,采集血清和肝脏样本。试剂盒检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)活性以及总胆红素(TBIL)、白蛋白(ALB)、总蛋白(TP)水平。HE染色和天狼猩红染色后,光镜下观察肝组织形态学变化。试剂盒检测肝组织羟脯氨酸(Hyp)水平以及超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)活性。Western blot检测肝组织自噬相关蛋白LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ的表达水平。结果:①与模型组相比,FZHY组和刺山柑低、高剂量组小鼠的ALT、AST、ALP、TBIL水平显著降低(P0.05,P0.01),TP和ALB水平显著升高(P0.01);且刺山柑高剂量组小鼠的ALT和AST水平明显低于低剂量组(P0.05,P0.01)。②HE染色和天狼猩红染色观察显示,模型组小鼠肝细胞可见大面积出血性坏死,纤维组织广泛增生形成间隔,并将肝组织包围形成假小叶;与模型组相比,FZHY组及刺山柑低、高剂量组小鼠的肝组织形态均有不同程度改善,肝细胞坏死明显减少,同时纤维增生有所减轻,假小叶逐渐消失;且刺山柑高剂量组的改善作用优于低剂量组。半定量分析结果表明,FZHY组和刺山柑高剂量组的胶原阳性染色面积占比较模型组显著降低(P0.05)。③与模型组相比,FZHY组及刺山柑低、高剂量组小鼠肝组织Hyp含量显著降低(P0.01),SOD水平显著升高(P0.01),MDA水平显著降低(P0.05,P0.01)。④Western blot结果显示,刺山柑低、高剂量组小鼠肝组织LC3-Ⅱ蛋白表达较模型组显著上调(P0.01),但LC3-Ⅰ蛋白表达无明显变化。结论:刺山柑果实提取物可有效减轻CCl_4诱导的小鼠肝纤维化,明显改善模型小鼠的肝功能及病理损伤,其作用机制与抑制肝脏胶原纤维生成、清除氧自由基和促进线粒体自噬有关。
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