| pcDNA3-MAGE-1真核表达载体的构建及其在Hepal-6细胞中的稳定表达 |
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| 引用本文： | 杨广民,齐亚灵,李首庆,马寅芙,谭岩,时阳. pcDNA3-MAGE-1真核表达载体的构建及其在Hepal-6细胞中的稳定表达[J]. 吉林大学学报(医学版), 2010, 36(1): 49-53 |
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| 作者姓名： | 杨广民 齐亚灵 李首庆 马寅芙 谭岩 时阳 |
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| 作者单位： | 吉林省人民医院中心实验室,吉林长春,130021;吉林大学第一医院中心实验室,吉林长春,130021;佳木斯大学基础医学院组织学与胚胎学教研室,黑龙江佳木斯,154007;吉林省人民医院中心实验室,吉林长春,130021;吉林大学第一医院中心实验室,吉林长春,130021 |
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| 基金项目： | 吉林省科技厅科技发展计划项目资助课题(200705449,200905192);;吉林省卫生厅重点实验室项目资助课题(2006年) |
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| 摘 要： | 目的:构建真核表达载体，并在小鼠肝癌Hepa1-6细胞中稳定表达，观察转染细胞的增殖能力和致瘤能力。方法:用PCR方法扩增SMMC-7721人肝癌细胞株MAGE-1全长序列，连接到真核表达载体pcDNA3中,构建真核表达pcDNA3-MAGE-1，脂质体法转染小鼠Hepa1-6细胞。G418筛选阳性克隆(Hepa1-6- MAGE-1)，用RT-PCR和Western blotting检测阳性克隆中mRNA和蛋白质的表达；MTT 法检测Hepa1-6细胞和Hepa1-6- MAGE-1细胞生长和增殖的变化；分别以Hepa1-6细胞和Hepa1-6- MAGE-1细胞接种于C57BL /6j小鼠右侧背部皮下，观察Hepa1-6- MAGE-1细胞的致瘤能力。结果:构建MAGE-1的真核表达载体转染Hepa1-6细胞，PT-PCR与Western boltting检测分别在Hepa1-6- MAGE-1细胞中检测到人MAGE-1基因的mNRA和蛋白质的表达,两组细胞增殖无统计学差异；两组各10只小鼠均皮下成瘤，且肿瘤大小没有明显差异。结论:成功构建了真核表达载体pcDNA3-MAGE-1，获得了稳定表达人MAGE-1基因的小鼠肝癌Hepa1-6细胞株，并具有很好的增殖和致瘤能力。
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| 关 键 词： | MAGE-1 真核表达载体 基因转染 免疫疗法 |
| 收稿时间： | 2009-09-21 |
Construction of eukaryotic expression vector pcDNA3-MAGE-1 and its stable expression in mouse Hepa1-6 cells |
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| YANG Guang-min,,QI Ya-ling,LI Shou-qing,MA Yin-fu,TAN Yan,SHI Yang. Construction of eukaryotic expression vector pcDNA3-MAGE-1 and its stable expression in mouse Hepa1-6 cells[J]. Journal of Jilin University: Med Ed, 2010, 36(1): 49-53 |
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| Authors: | YANG Guang-min QI Ya-ling LI Shou-qing MA Yin-fu TAN Yan SHI Yang |
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| Affiliation: | (1.Central Laboratory,People’s Hospital of Jilin Province,Changchun 130021,China;2.Central Laboratory,First Hospital| Jilin University|Changchun 130021,China;3. Department of Histology and Embryology,College of Basic Medical Sciences| Jiamusi University,Jiamusi 154007,China) |
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| Abstract: | Objective To construct the eukaryotic expression vector and express in mouse liver cancer cell Hepa1-6,and observe reproductive activity and tumorigenesis ability of transfected cells.Methods The MAGE-1 total length sequence was amplified from SMMC-7721 by PCR and linked to pcDNA3 to construct pcDNA3-MAGE-1.The expression vector was transfected into Hepa1-6 cells by lipofectamine,and then the positive clones were screened by G418.The expressions of mRNA and protein in positive clones were detected by RT-PCR... |
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| Keywords: | MAGE-1 eukaryotic expression vector gene transfection immunotherapy |
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