白细胞介素12对小鼠肝癌基因治疗的实验研究

目的：研究白细胞介素１２对小鼠肝癌细胞基因治疗效果。方法：利用脑心肌炎病毒（ＥＭＣＶ）及脊髓灰质炎（Ｐｏ－ｌｉｏ）病毒内核糖体进入位点（ＩＲＥＳ），连接ｍＩＬ－１２ Ｐ４０及ｐ３５ ｃＤＮＡｓ和筛选基因新霉术磷酸转移酶（ＮｅｏＲ），克隆至逆转录病毒载体ｐＧＣＥＮ中，使三个基因同时受逆转录病毒载体５’端ＬＴＲ启动子控制，转录至同一ｍＲＮＡ转录本上，从而构建成多顺反子逆转录病毒载体，即ｐＧＣＥＮ／ｍＩＬ－１２。在ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ介导下将ｐＧＣＥＮ／ｍＩＬ－１２转染包装细胞ＰＡ３１７，Ｇ４１８筛选，直至出现阳性克隆（命名为：Ｍ４５／ｍＩＬ－１２），挑取抗性克隆，扩大培养，收集上清，用小鼠成纤维细胞ＮＩＨ３Ｔ３测定病毒滴度。然后用重组逆转录病毒感染小鼠肝癌细胞ＭＭ４５Ｔ．Ｌｉ，Ｇ４１８筛选，直至出现阳性克隆，扩大培养，对阳性克隆进行鉴定。将６０Ｃｏ照射（６０ Ｇｙ）Ｍ４５／ｍＩＬ－１２细胞对荷瘤小鼠进行瘤内接种，每周一次，连续治疗三次，观察其治疗效果。结果：病毒上清中重组逆转录病毒滴度为５×１０~５ＣＦＵ／ｍｌ。 ＰＣＲ及ＲＴ－ＰＣＲ证明外源基因已整合至小鼠肝癌细胞基因组中，以及外源基因在ｍＲＮＡ水平上的表达。

Interleukin-12 Gene Therapy for Murine Liver Cancer MM45T.Li