| NNMT基因启动子双荧光素酶报告系统的构建及其与SND1靶向关系的验证 |
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| 引用本文： | 卢鑫1,2,任媛媛3,葛林3,杨洁3,何津岩4,付晓3. NNMT基因启动子双荧光素酶报告系统的构建及其与SND1靶向关系的验证[J]. 天津医科大学学报, 2021, 0(4): 413-418 |
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| 作者姓名： | 卢鑫1 2 任媛媛3 葛林3 杨洁3 何津岩4 付晓3 |
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| 作者单位： | （1.天津医科大学基础医学院细胞生物学系，天津 300070；2.天津医科大学总医院检验科，天津 300052；3.天津医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系，天津 300070；4.天津医科大学基础医学院生理学与病理生理学系，天津 300070） |
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| 摘 要： | 目的:构建尼克酰胺-N-甲基转移酶（NNMT）启动子区的双荧光素酶报告质粒并检测其活性，从而验证SND1蛋白对NNMT基因的调控作用。方法:根据NNMT基因启动子区上、下游-1 500至+200区间的序列设计引物，并以HepG2细胞提取的RNA逆转录得到cDNA为模板进行PCR扩增，得到的NNMT启动子区片段经酶切后连接到双荧光素报告载体GLuc-ONTM启动子报告克隆中，得到Gluc-NNMT 启动子重组质粒，分别与pLVX-IRES-Puro-Flag-SND1质粒和pLVX-IRES-Puro-vector质粒共同转染HeLa细胞，并检测启动子活性。然后用免疫共沉淀的方法验证NNMT蛋白是否与SND1蛋白之间存在相互作用。结果:重组质粒构建成功。双荧光素酶活性实验显示，共转染Gluc-NNMT启动子重组质粒和pLVX-IRES-Puro-Flag-SND1过表达质粒的实验组与对照组相比，NNMT启动子区活性明显增强。结合免疫共沉淀实验结果，证明NNMT与SND1存在相互作用。结论:成功构建了NNMT启动子双荧光素酶报告质粒，SND1对NNMT启动子活性有增强作用，SND1与NNMT蛋白之间存在相互作用。
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| 关 键 词： | NNMT SND1 双荧光素酶报告基因 免疫共沉淀 蛋白相互作用 |
Construction of NNMT promoter dual luciferase reporter system and verification of its targeting relationship with SND1 |
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| LU Xin1,' target="_blank" rel="external">2,REN Yuan-yuan3,GE Lin3,YANG Jie3,HE Jin-yan4,FU Xiao3. Construction of NNMT promoter dual luciferase reporter system and verification of its targeting relationship with SND1[J]. Journal of Tianjin Medical University, 2021, 0(4): 413-418 |
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| Authors: | LU Xin1,' target=" _blank" rel=" external" >2,REN Yuan-yuan3,GE Lin3,YANG Jie3,HE Jin-yan4,FU Xiao3 |
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| Affiliation: | （1.Department of Cellular Biology, School of Basic Medical Sciences, Tianjin Medical University, Tianjin 300070, China；2. Clinical Laboratory, General Hospital，Tianjin Medical University，Tianjin 300052，China；3. Department of Medical Biochemistry and Molecular Biology，School of Basic Medical Sciences，Tianjin Medical University，Tianjin 300070，China；4. Department of Physiology and Pathophysiology，School of Basic Medical Sciences，Tianjin Medical University，Tianjin 300070，China） |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | - |
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