| 稳定表达野生型PINK1蛋白SH-SY5Y细胞株的建立 |
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| 引用本文： | 原相丽,张玉虎,廖书胜,赵保路,唐北沙.稳定表达野生型PINK1蛋白SH-SY5Y细胞株的建立[J].新乡医学院学报,2008,25(3):240-244. |
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| 作者姓名： | 原相丽 张玉虎 廖书胜 赵保路 唐北沙 |
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| 作者单位： | 中南大学湘雅医院神经内科; 中国科学院生物物理研究所脑与认知国家重点实验室; 中南大学湘雅医院神经内科 |
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| 摘 要： | 目的构建常染色体隐性遗传早发性帕金森综合征(AREP)PINK1基因真核表达载体,建立稳定表达PINK1蛋白的人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞株。方法采用聚合酶链反应(PCR)方法,以人胎脑cDNA文库为模板扩增PINK1基因全长cDNA编码区序列,重组DNA技术定向插入真核表达质粒pcDNA3.1-myc-his(-)B,经酶切和测序鉴定后,用脂质体转染SH-SY5Y细胞,通过G418筛选,挑选出稳定转染的单克隆株,经提取gDNA进行PCR扩增、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot法检测PINK1基因在DNA、mRNA水平及蛋白水平的表达。结果成功构建了PINK1-pcDNA3.1-myc-his-(-)B真核表达载体,稳定转染SH-SY5Y细胞后,经提取gDNA扩增、RT-PCR及Westernblot检测到了野生型PINK1基因在基因组的整合、转录和蛋白水平表达。结论构建了PINK1基因真核表达载体和稳定表达PINK1蛋白的SH-SY5Y细胞株,为进一步研究PINK1基因功能及AREP发病机制提供了一个转基因细胞模型。
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| 关 键 词： | 常染色体隐性遗传早发性帕金森综合征 PINK1 稳定转染 SH-SY5Y细胞 |
| 文章编号： | 1004-7239(2008)03-0240-04 |
| 修稿时间： | 2008年2月26日 |
Establishment of stable expression of wild-type PINK1 protein SH-SY5Y cell line |
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| YUAN Xiang-li,ZHANG Yu-hu,LIAO Shu-sheng,et al.Establishment of stable expression of wild-type PINK1 protein SH-SY5Y cell line[J].Journal of Xinxiang Medical College,2008,25(3):240-244. |
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| Authors: | YUAN Xiang-li ZHANG Yu-hu LIAO Shu-sheng |
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| Institution: | YUAN Xiang-li1,ZHANG Yu-hu1,LIAO Shu-sheng1,et al |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | autosomal recessive early-onset parkinsonism PINK1 stable transfection SH-SY5Y cell |
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