| 人促血液血管细胞生成素的高效表达和快速纯化 |
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| 引用本文： | 任倩,刘拥军,徐斌,韩之波,卢士红,马凤霞,韩忠朝.人促血液血管细胞生成素的高效表达和快速纯化[J].实用心脑肺血管病杂志,2005,13(6):321-325. |
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| 作者姓名： | 任倩 刘拥军 徐斌 韩之波 卢士红 马凤霞 韩忠朝 |
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| 作者单位： | 300020,天津,中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所,实验血液学国家重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家科技部“十五”重大科技专项（2002AA223354）以及国家自然基金（30300186）博士点基金（2003023002） |
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| 摘 要： | 目的 构建人促血液血管细胞生成素（HAPO）的表达载体，获得纯化的HAPO蛋白并研究其生物学功能。方法 通过PCR方法扩增人HAPO基因，克隆于不同的原核表达载体，ITPG诱导融合蛋白表达。NTA层析柱纯化融合蛋白，再经肠激酶裂解融合蛋白，阳离子交换层析纯化，得到纯化的重组蛋白。用培养的MO7e和ECV-304细胞检测蛋白活性。结果 HAPO可在pET32C中，获得稳定高效的可溶性表达。在Ecoli BL21（DE3）中，HAPO表达量可占菌体总蛋白的10％左右。重组蛋白80％是以可溶性蛋白形式存在。NTA层析柱纯化得到的HAPO融合蛋白，再经肠激酶裂解，阳离子交换层析纯化，得到90％以上纯度的重组HAPO蛋白，并且具有良好的生物学活性。结论 得到具有90％以上纯度的重组HAPO蛋白，而且，对MO7e和ECV-304细胞具有促增殖的作用。我们获得了纯化的人重组HAPO蛋白，为进一步研究其功能及临床应用打下基础。
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| 关 键 词： | 人促血液血管细胞生成素 pET32C 融合蛋白 纯化 层析纯化 细胞生成素 高效表达 ECV-304细胞 血管 血液 |
| 收稿时间： | 2005-07-22 |
| 修稿时间： | 2005-08-29 |
High-level expression and rapid purification of recombinant human hemangiopoietin |
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| Ren Qian, Liu Yongjun, Xu Bin,et al..High-level expression and rapid purification of recombinant human hemangiopoietin[J].Practical Journal of Cardiac Cerebral Pneumal and Vascular Disease,2005,13(6):321-325. |
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| Authors: | Ren Qian Liu Yongjun Xu Bin |
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| Institution: | Ren Qian, Liu Yongjun, Xu Bin, et al. |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Hemangiopoietin pET32C Fusion protein Purification |
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