| 抑制Coronin-1基因表达的siRNA载体的构建和筛选 |
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| 引用本文： | 严莎,陈全,吕玉春,侯艳,王瑜伟.抑制Coronin-1基因表达的siRNA载体的构建和筛选[J].细胞与分子免疫学杂志,2010,26(4). |
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| 作者姓名： | 严莎 陈全 吕玉春 侯艳 王瑜伟 |
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| 作者单位： | 1. 重庆医科大学基础医学院免疫学教研室,重庆,400016;重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心,重庆,400016
2. 重庆医科大学基础医学院免疫学教研室,重庆,400016;重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室,重庆,400016 |
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| 基金项目： | 高等学校博士学科点专项科研基金资助(20070631006) |
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| 摘 要： | 目的:构建和筛选能高效、特异性抑制Coronin-1基因表达的siRNA表达载体。方法:提取鼠巨噬细胞总RNA,RT-PCR扩增Coronin-1基因目标序列,克隆入pSEB-HUS真核表达质粒,构建pSEB-HUS-C重组质粒。将设计、合成的3条siRNA及阴性对照分别克隆入pSEB-HUS-C,构建重组pSEB-HUS-C1、pSEB-HUS-C2、pSEB-HUS-C3及pSEB-HUS-CN质粒。将干涉质粒瞬时转染A549细胞,通过绿色荧光信号观察、实时定量PCR和Western blot法检测其对Coro-nin-1基因表达的影响。结果:经双酶切及测序证实,所构建siRNA表达载体目的基因大小、序列与预期相符。经瞬时转染A549细胞后,其中的pSEB-HUS-C3能明显抑制Coronin-1 mRNA的表达和Coronin-1蛋白的合成,抑制率分别是75.9%和75.1%。结论:成功构建并筛选出高效、特异性抑制Coro-nin-1表达的siRNA表达载体,为进一步研究Coronin-1在巨噬细胞中的作用奠定基础。
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| 关 键 词： | Coronin-1 RNA干扰 siRNA质粒载体 结核分支杆菌 |
Construction of a siRNA plasmid for knockdown of Coronin-1 |
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| YAN Sha,CHEN Quan,L Yu-chun,HOU Yan,WANG Yu-wei.Construction of a siRNA plasmid for knockdown of Coronin-1[J].Journal of Cellular and Molecular Immunology,2010,26(4). |
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| Authors: | YAN Sha CHEN Quan L Yu-chun HOU Yan WANG Yu-wei |
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| Institution: | YAN Sha,CHEN Quan,L(U) Yu-chun,HOU Yan,WANG Yu-wei |
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| Abstract: | AIM:To construct a siRNA plasmid to knockdown Coronin-1. METHODS:The cDNA of coronin-1 was amplified by RT-PCR from the total RNA of macrophage,and then inserted into pSEB-HUS vector to generate pSEB-HUS-C plasmid. Three synthesized siRNAs targeting Coronin-1 were cloned into pSEB-HUS-C respectively,resulting in the pSEB-HUS-C1,pSEB-HUS-C2 and pSEB-HUS-C3 plasmids. These plasmids were transiently transfected into A549,and the Coronin-1 level was detected by RT-PCR,Real time PCR and Western blot. RESULTS:All... |
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| Keywords: | Coronin-1 RNAi siRNA plasmid Mycobacterium tuberculosis |
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