shRNA抑制淋巴细胞TNFα的表达

目的观察RNA干扰技术是否有效抑制原代培养的脾淋巴细胞肿瘤坏死因子α(TNFα)的表达。方法体外合成针对TNFα基因序列的特异性发夹状双链RNA(shRNA)的表达载体,与L ipofectam ine2000结合后转染原代培养的由脂多糖(LPS)激活的脾淋巴细胞,用ELISA和RT-PCR法检测TNFα表达的变化。结果ELISA检测结果表明,特异性RNA干扰组TNFα蛋白表达较对照组下降34.2%,而非特异性干扰组TNFα表达与对照组无明显差异;RT-PCR检测结果表明,特异性RNA干扰组TNFαmRNA表达较对照组下降61.3%。结论RNA干扰可以有效抑制原代培养的淋巴细胞TNFα的表达,该过程具有严格的基因序列特异性,为TNFα相关疾病的基因治疗提供了新策略。