| 高分辨率熔解曲线在CRISPR基因编辑检测和基因型鉴定中的应用 |
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| 作者姓名： | 贺文 吴婉婉 陆平 薛志刚 盛哲津 祝献民 |
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| 作者单位： | 同济大学医学院,上海200092,同济大学生命科学与技术学院,上海200092,同济大学医学院,上海200092,同济大学医学院,上海200092,同济大学生命科学与技术学院,上海200092,同济大学生命科学与技术学院,上海200092 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金重点项目（81430026）;上海市科委基础研究领域项目（16JC1404700） |
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| 摘 要： | 目的 建立一种基于PCR和在线高分辨率熔解曲线（high-resolution melting curve, HRM）分析工具的检测方法,实现对DNA序列微小差异的快速检测。方法 在CRISPR基因编辑检测和基因型鉴定中,采用两步PCR,分别对目的片段进行扩增和富集,并通过免费在线软件对HRM进行分析。结果 HRM分析结果显示,本实验所设计的CRISPR慢病毒系统未能对COS7细胞中的RPE65基因进行有效的基因编辑;而在瘦素突变大鼠的子代基因型中,HRM可以明显区分杂合子和纯合子。结论 HRM能够快速鉴定CRISPR编辑和区分基因型。
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| 关 键 词： | 高分辨率熔解曲线 CRISPR 聚合酶链式反应 基因型 |
| 收稿时间： | 2018-01-26 |
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