| 慢病毒介导HLA-G转基因小鼠的建立 |
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| 引用本文： | 王露露,刘勤,周晓杨,刘昌峨,王勇,魏泓. 慢病毒介导HLA-G转基因小鼠的建立[J]. 第三军医大学学报, 2012, 34(14): 1392-1396 |
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| 作者姓名： | 王露露 刘勤 周晓杨 刘昌峨 王勇 魏泓 |
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| 作者单位： | 1.第三军医大学基础医学部实验动物学教研室,重庆,400038;2.第三军医大学基础医学部实验动物学教研室,重庆,400038;3.第三军医大学基础医学部实验动物学教研室,重庆,400038;4.第三军医大学基础医学部实验动物学教研室,重庆,400038;5.第三军医大学基础医学部实验动物学教研室,重庆,400038;6.第三军医大学基础医学部实验动物学教研室,重庆,400038 |
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| 摘 要： | [目的]以慢病毒作为载体建立HLA-G转基因小鼠,为研究HLA-G与移植免疫提供模型动物.[方法]利用FUW载体,构建含有HLA-G编码序列的慢病毒表达载体FUW-HLA-G.用磷酸钙沉淀法将包装质粒psPAX2、PMD2.G与重组慢病毒载体质粒FUW-HLA-G共转染293FT细胞,包装成慢病毒.通过同步转染含有绿色荧光标记基因的慢病毒质粒FUGW为参照,测定FUW-HLA-G病毒液的滴度.用显微注射法将浓缩后的病毒液注射至FVB/N小鼠1-细胞期胚胎透明带下,建立HLA-G转基因小鼠.PCR鉴定转基因小鼠的基因整合,用RT-PCR检测转基因在转录水平的表达,用Western blot检测HLA-G蛋白的表达.[结果]载体BamH I、EcoR I双酶切结果和测序结果显示重组的慢病毒质粒与所设计的序列一致.浓缩和纯化后的病毒液滴度达到109TU/ml以上,符合用慢病毒制备转基因小鼠的要求.PCR筛选出阳性鼠6只,RT-PCR与Western blot检测结果表明HLA-G基因在F0和F1代转基因小鼠中均有表达.[结论]通过慢病毒介导的基因转移,成功建立了表达人HLA-G蛋白的转基因小鼠,为研究HLA-G的功能及其在器官或组织移植中的效应提供了动物模型.
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| 关 键 词： | HLA-G 慢病毒 转基因小鼠 |
Preparation of lentivirus-mediated HLA-G transgenic mice |
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| Wang Lulu,Liu Qin,Zhou Xiaoyang,Liu Chang’e,Wang Yong,Wei Hong. Preparation of lentivirus-mediated HLA-G transgenic mice[J]. Acta Academiae Medicinae Militaris Tertiae, 2012, 34(14): 1392-1396 |
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| Authors: | Wang Lulu Liu Qin Zhou Xiaoyang Liu Chang’e Wang Yong Wei Hong |
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| Affiliation: | (Department of Laboratory Animal Science,College of Basic Medical Sciences,Third Military Medical University,Chongqing,400038,China) |
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