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| 抑制端粒保护蛋白TPP1表达诱导ATM依赖的DNA损伤反应 | |
| 引用本文： | 郭晓兰,袁国华,周京国,唐中,刘宁涛,杨明辉,青玉凤,吴凤霞,朱道银.抑制端粒保护蛋白TPP1表达诱导ATM依赖的DNA损伤反应[J].第四军医大学学报,2008,29(3):262-265. |
| 作者姓名： | 郭晓兰 袁国华 周京国 唐中 刘宁涛 杨明辉 青玉凤 吴凤霞 朱道银 |
| 作者单位： | 1. 重庆医科大学免疫学教研室,重庆,400016 2. 川北医学院附属医院风湿免疫研究所,四川,南充,637000 3. 四川省遂宁市人民医院风湿科,四川,遂宁,629000 |
| 摘 要： | 目的:构建端粒保护蛋白TPP1短发夹RNA表达载体,探讨抑制TPP1表达后对端粒DNA损伤及细胞增殖的影响.方法:体外构建端粒保护蛋白TPP1 shRNA逆转录病毒表达载体shTPP1-01,shTPP1-02,与表达外源性TPP1的TPP1-HA质粒共同转染293T细胞,Western Blot检测shTPP1抑制外源性TPP1蛋白表达;RT-PCR检测shTPP1抑制小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast, MEF)内源性TPP1 mRNA的表达. 再用shTPP1分别感染ATM / MEF和ATM-/- MEF细胞后,分别采用细胞生长曲线和BrdU掺入法检测细胞增殖,免疫荧光/端粒肽核酸荧光原位杂交法(IF/PNA-FISH)检测端粒功能障碍诱导损伤灶(TIF)的形成.结果:shTPP1-01和shTPP1-02均能明显抑制外源性TPP1蛋白和内源性TPP1mRNA的表达,shTPP1-01和shTPP1-02作用于原代培养的MEFs后细胞生长缓慢,BrdU阳性细胞数量分别占8.0%和8.7%,显著低于对照细胞的29.3%(P＜0.01, P＜0.01);而细胞表现为体积变大,形态扁平等类似细胞衰老的形态学改变;IF/PNA-FISH法检测结果显示,shTPP1作用于ATM / MEF细胞后导致端粒DNA损伤标志物-磷酸化的H2AX(γ-H2AX)和53BP1损伤灶(TIF)的形成,定量结果显示约50%的ATM / 细胞中出现至少5个TIF;而在shTPP1作用后的ATM-/-细胞中,端粒γ-H2AX 和53BP1形成的TIF数量显著减少,出现5个TIF的细胞数量不足5%,与对照组细胞相比无显著性差异.结论:抑制TPP1表达后诱发端粒ATM依赖的DNA损伤反应,进而抑制细胞增殖,促进细胞衰老. |
| 关 键 词： | 端粒 短发夹RNA 损伤反应 |
| 文章编号： | 1000-2790（2008）03-0262-04 |
| 收稿时间： | 2007-09-14 |
| 修稿时间： | 2007-12-01 |
Knockdown of TPP1 initiates ATM-dependent DNA damage response at telomeres |
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| GUO Xiao-Lan,YUAN Guo-Hua,ZHOU Jing-Guo,TANG Zhong,LIU Ning-Tao,YANG Ming-Hui,QING Yu-Feng,WU Feng-Xia,ZHU Dao-Yin.Knockdown of TPP1 initiates ATM-dependent DNA damage response at telomeres[J].Journal of the Fourth Military Medical University,2008,29(3):262-265. | |
| Authors: | GUO Xiao-Lan YUAN Guo-Hua ZHOU Jing-Guo TANG Zhong LIU Ning-Tao YANG Ming-Hui QING Yu-Feng WU Feng-Xia ZHU Dao-Yin |
| Abstract: | |
| Keywords: | DNA |
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