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| 抗TfR scFv-SLC融合蛋白的构建、表达与鉴定 | |
| 引用本文： | 潘兴飞,刘静,沈昕,许海霞,姚欣欣,陈广生,胡军,朱慧芬,雷萍,沈关心. 抗TfR scFv-SLC融合蛋白的构建、表达与鉴定[J]. 中国免疫学杂志, 2009, 25(9) |
| 作者姓名： | 潘兴飞 刘静 沈昕 许海霞 姚欣欣 陈广生 胡军 朱慧芬 雷萍 沈关心 |
| 作者单位： | 1. 陕西省人民医院中心实验室,西安,710061 2. 华中科技大学同济医学院免疫学系,武汉,430030 3. 华中科技大学同济医学院免疫学系,武汉,430030;陕西省人民医院中心实验室,西安,710061 |
| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划)资助项目，教育部博士点专项资金，新教师基金课题，湖北省卫生厅重点科技攻关项目 |
| 摘 要： | 目的:构建、表达和鉴定抗转铁蛋白受体(TfR)单链抗体(scFv)-次级淋巴组织趋化因子(SLC)融合蛋白.方法:以pDsRed2-N1-CCL21为模板,设计引物,采用PCR扩增得到两端有EcoRⅠ、NotⅠ酶切位点的SLC基因.以EcoRⅠ、NotⅠ双酶切pET28a+scFv载体和PCR产物,连接后转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导TfR scFv-SLC融合蛋白的表达.SDS-PAGE、Western blot分析TfR scFv-SLC的表达特性.FCM测定scFv-SLC与肿瘤细胞结合活性.结果:EcoRⅠ和NotⅠ双酶切鉴定可见约350 bp的小片段,与SLC的理论值相符,DNA测序结果表明含有TfR scFv-Linker-SLC序列,表明pET28a+scFv-SLC融合基因表达载体构建成功.IPTG诱导产物经SDS-PAGE分析可见约41 kD的条带,符合scFv-SLC理论值.FCM结果显示TfR scFv-SLC可与MCF-7、HepG2细胞结合,且结合的阳性率较TfR scFv有所提高.结论:成功构建与表达scFv-SLC融合蛋白,且能与MCF7、HepG2等细胞特异性结合. |
| 关 键 词： | 转铁蛋白受体 单链抗体 次级淋巴组织趋化因子 融合蛋白 |
Construction,expression and characterization of TfR scFv-SLC fusion protein |
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| PAN Xing-Fei,LIU Jing,SHEN Xin,XU Hai-Xia,YAO Xin-Xin,CHEN Guang-Sheng,HU Jun,ZHU Hui-Fen,LEI Ping,SHEN Guan-Xin. Construction,expression and characterization of TfR scFv-SLC fusion protein[J]. Chinese Journal of Immunology, 2009, 25(9) | |
| Authors: | PAN Xing-Fei LIU Jing SHEN Xin XU Hai-Xia YAO Xin-Xin CHEN Guang-Sheng HU Jun ZHU Hui-Fen LEI Ping SHEN Guan-Xin |
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