| 携带人Sox2和EGFP基因慢病毒表达载体构建 |
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| 引用本文： | 姚志芳,肖高芳,史俊文,王赫,申红芬,肖东,姚开泰. 携带人Sox2和EGFP基因慢病毒表达载体构建[J]. 热带医学杂志, 2010, 10(3) |
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| 作者姓名： | 姚志芳 肖高芳 史俊文 王赫 申红芬 肖东 姚开泰 |
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| 作者单位： | 1. 南方医科大学肿瘤研究所,广州,510515
2. 南方医科大学肿瘤研究所,广州,510515;南方医科大学比较医学研究所暨实验动物中心,广州,510515 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金委员会-广东省联合基金重点项目，国家自然科学基金，广东省自然科学基金，广东省卫生厅资助项目，南方医科大学优秀中青年科技人才库科研资助金，广州地区科学仪器协作共用网专用基金 |
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| 摘 要： | 目的 构建携带人Sox2和EGFP基因的慢病毒表达载体pFUSGW.方法 Xho Ⅰ线性化pLentiEF1a-SOx2-IRES-EGFP,回收片段并补平Xho Ⅰ切口,接着BamH Ⅰ酶切该片段,回收2.356 kb片段而获连接用Sox2-IRES-EGFP;EcoR Ⅰ线性化pFUGW,回收并补平EcoR Ⅰ切口,然后BamH Ⅰ酶切该片段,回收9.174 kb片段获连接用载体片段,最后使用DNA连接试剂盒(TaKaRa)中的Solution Ⅰ将其与连接用Sox2-IRES-EGFP连接,连接产物转化,次日挑选单菌落,提取质粒并行酶切鉴定.所构建载体命名为pFUSGW.获pFUSGW后,按Invitrogen公司推荐的标准程序进行慢病毒包装和确认慢病毒是否成功生产;携带Sox2和EGFP基因的慢病毒感染小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)、人胚肺成纤维细胞(HLFs)和人神经胶质瘤细胞(U87)以建立相应病毒感染体系.结果 酶切证实成功构建了pFUSGW,按标准程序生产的携带SOx2和EGFP基因的慢病毒上清高效率感染MEFs、HLFs及U87.结论 成功构建携带人Sox2和EGFP基因的慢病毒表达载体pFUSGW,为相关后续的研究打下了良好的基础.
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| 关 键 词： | 慢病毒载体 |
Construction of A Lentiviral Expression Vector Harboring Human Sox2 and EGFP Genes |
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| YAO Zhi-fang,XIAO Gao-fang,SHI Jun-wen,WANG He,SHEN Hong-fen,XIAO Dong,YAO Kai-tai. Construction of A Lentiviral Expression Vector Harboring Human Sox2 and EGFP Genes[J]. Journal Of Tropical Medicine, 2010, 10(3) |
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| Authors: | YAO Zhi-fang XIAO Gao-fang SHI Jun-wen WANG He SHEN Hong-fen XIAO Dong YAO Kai-tai |
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| Affiliation: | YAO Zhi-fang1,XIAO Gao-fang1,SHI Jun-wen1,WANG He1,SHEN Hong-fen1,XIAO Dong1,2,YAO Kai-tai1(1.Cancer Research Institute,Southern Medical University,Guangzhou 510515,2.Institute of Comparative Medicine , Center of Experimental Animals,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Sox2 EGFP |
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