慢性髓性白血病bcr/abl融合基因的克隆与表达

目的：克隆bcr／abl融合基因融合位点基因片段。方法：以慢性粒细胞白血病（CML）K562细胞株总RNA作为模板，采用RT—PCR方法扩增包含Bcr／abl（b3a2）融合位点基因片段。将RT—PCR物按正确的阅读框架，定向克隆到pEGFP—N3的下游，将重组质粒转化大肠杆JM109大肠杆菌，用PCR初筛，将PCR扩增阳性的重组子用EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切鉴定，并进行序列的测定。结果：扩增出470bp的Bcr／abl融合位点基因片段，构建重组质粒pEGFP—bcr／abl，酶切产物的大小分别与预期相符。结论：成功地扩增bcr／abl融合位点基因片段及构建真核表达重组质粒pEGFP—bcr／abl，为在体外表达重组bcr／abl蛋白奠定基础。