| 人骨形成蛋白7基因重组2型腺相关病毒载体的构建及其在骨髓间充质干细胞中的表达 |
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| 作者姓名： | Kang Y Liao WM Sheng PY Zhang LJ Yuan XW Lei L Huang BD |
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| 作者单位： | 中山大学附属第一医院骨科,广州,510080 |
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| 摘 要： | 目的构建人骨形成蛋白7基因（hBMP7）重组腺相关病毒载体,并观察其在兔骨髓间充质干细胞中的表达。方法将骨形成蛋白7基因片段克隆入穿梭质粒pUC18获得重组质粒pUC18-hBMP7。KpnⅠ和鼠Ⅱ双酶切质粒pUC18-hBMP7／与pSNAV,用T4DNA连接酶连接分别回收的两片段后转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,获得重组质粒PSNAV—hBMP7／,转染BHK-21细胞,筛选培养,用能表达Rap和Cap的重组Ⅰ型单纯疱疹病毒HSVl-rc／△UL2感染此细胞,裂解细胞收获病毒液。采用氯仿处理-PEG／NaCl沉淀-氯仿抽提法分离浓缩、纯化与测定病毒滴度。用rAAV2-hBMP7／和rAAV2-EGFP在体外分别转染兔骨髓间充质干细胞。流式细胞仪、RT-PCR和Western—blot方法检测兔骨髓间充质干细胞中hBMP-7基因的转录和表达。结果成功构建具有感染活性的重组腺相关病毒载体rAAV2-hBMP7／,病毒载体对兔骨髓间充质干细胞早期转染效率可达99．8％,hBMP7／在兔骨髓间充质干细胞中可得到转录和表达。结论成功构建了人骨形成蛋白7基因重组腺相关病毒载体,rAAV2-hBMP7／载体在体外可转染兔骨髓间充质干细胞,并获得较高的转染效率。
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| 关 键 词： | 骨髓祖代细胞 中胚层 人骨形成蛋白 腺相关病毒 |
| 修稿时间： | 2007-01-30 |
Construction and identification of human bone morphogenetic protein-7 recombinant adeno-associated virus type 2 vector and its expression in bone mesenchymal stem cells |
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| Kang Y,Liao WM,Sheng PY,Zhang LJ,Yuan XW,Lei L,Huang BD.Construction and identification of human bone morphogenetic protein-7 recombinant adeno-associated virus type 2 vector and its expression in bone mesenchymal stem cells[J].Chinese Journal of Surgery,2007,45(18):1279-1283. |
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| Authors: | Kang Yan Liao Wei-ming Sheng Pu-yi Zhang Long-juan Yuan Xiang-wei Lei Lei Huang Bao-ding |
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| Institution: | Department of Orthopaedics, the First Hospital, Sun Yat-Sen University, Guangzhou 510080, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Myeloid progenitor cells Mesoderm Bone morphogenetic protein Adeno-associated virus |
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