非对称RNA干扰抑制CDCA5基因表达对结直肠癌细胞增殖的影响

【摘要】 目的 探讨非对称抑制CDCA5基因的表达对人结直肠癌细胞增殖的影响，并探讨其可能的作用机制。方法 收集2016年～2017年南充市中心医院行根治性手术的20例结直肠癌患者的癌组织标本及匹配的癌旁正常组织， Western blot检测结直肠癌组织和癌旁正常组织中CDCA5蛋白的表达。同时，Western blot检测结直肠癌细胞系HT29、HCT116及SW480细胞中CDCA5蛋白的表达，选择表达水平最高的细胞系进行后续研究。设计针对CDCA5基因的siRNA，阴性对照siRNA NC及三条长短不同的非对称小干扰RNA，即aiRNA（15/21）、aiRNA（16/21）和aiRNA（17/21）。PCR检测各组对CDCA5基因的沉默效果。MTT检测siRNA、siRNA NC和aiRNA（15/21）组的细胞增殖能力，流式细胞仪检测各组细胞周期的变化。结果 CDCA5在结直肠癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织（P＜005）。人结直肠癌细胞系HCT116中CDCA5蛋白的表达明显高于HT29和SW480细胞系（P＜005）。aiRNA（15/21）在各组中有最强的基因沉默效果（P＜005）。与siRNA和siRNA NC组相比，aiRNA（15/21）组细胞增殖能力低于其他两组，处于细胞周期G2/M期的细胞数量显著多于其他两组（均P＜005）。结论 CDCA5可能是治疗结直肠癌的一个重要靶点，基于CDCA5基因的特异性非对称aiRNA（15/21）干扰在沉默效率上优于传统siRNA。

Influence on the proliferation of colorectal cancer with silencing CDCA5 by the specific asymmetric structure interfering RNA