实时荧光定量RT-PCR技术快速检测H5亚型禽流感病毒 |
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引用本文: | 吕恒,张锦海,王长军,顾海涛,王平,鲁娟东. 实时荧光定量RT-PCR技术快速检测H5亚型禽流感病毒[J]. 解放军预防医学杂志, 2012, 30(6) |
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作者姓名: | 吕恒 张锦海 王长军 顾海涛 王平 鲁娟东 |
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作者单位: | 南京军区疾病预防控制中心,南京,210002 |
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基金项目: | 江苏省科技支撑计划(社会发展)项目,国家重大传染病专项课题,国家"十一五"科技重大项目,南京军区重点课题,南京军区重点课题 |
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摘 要: | ![]() 目的 建立快速检测H5亚型禽流感病毒HA基因的实时荧光定量RT-PCR方法,为禽流感病毒的监测和感染的预防控制提供科学的技术手段.方法 针对H5亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因保守区域设计特异性引物与荧光探针;通过体外克隆技术获得阳性定量标准品;优化探针、引物浓度、反应体系与反应条件,提高检测方法的特异性、敏感性与重复性,并进行定量分析.结果 反应体系具有良好的扩增效率,80 min内可完成扩增检测工作;检测灵敏度为100拷贝/反应,通过外标准品建立的标准曲线在一条直线上;3个外标准品的变异系数(CV)分别为2.60%、2.47%、2.44%;H5亚型禽流感病毒培养液、确诊人感染高致病性禽流感患者标本为阳性扩增结果,而其它流感病毒临床标本及阴性对照均呈阴性.结论 本研究建立的实时荧光定量RT-PCR方法具有敏感、快速、重复性好的特点,适合于H5亚型禽流感病毒的快速定量检测.
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关 键 词: | 实时荧光定量RT-PCR H5亚型禽流感病毒(AIV H5) 血凝素基因 |
RAPID DETECTION OF AVIAN INFLUENZA VIRUS H5 BY USING REAL-TIME RT-PCR |
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Abstract: | ![]()
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Keywords: | |
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