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实时荧光定量RT-PCR技术快速检测H5亚型禽流感病毒
引用本文:吕恒,张锦海,王长军,顾海涛,王平,鲁娟东. 实时荧光定量RT-PCR技术快速检测H5亚型禽流感病毒[J]. 解放军预防医学杂志, 2012, 30(6)
作者姓名:吕恒  张锦海  王长军  顾海涛  王平  鲁娟东
作者单位:南京军区疾病预防控制中心,南京,210002
基金项目:江苏省科技支撑计划(社会发展)项目,国家重大传染病专项课题,国家"十一五"科技重大项目,南京军区重点课题,南京军区重点课题
摘    要:
目的 建立快速检测H5亚型禽流感病毒HA基因的实时荧光定量RT-PCR方法,为禽流感病毒的监测和感染的预防控制提供科学的技术手段.方法 针对H5亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因保守区域设计特异性引物与荧光探针;通过体外克隆技术获得阳性定量标准品;优化探针、引物浓度、反应体系与反应条件,提高检测方法的特异性、敏感性与重复性,并进行定量分析.结果 反应体系具有良好的扩增效率,80 min内可完成扩增检测工作;检测灵敏度为100拷贝/反应,通过外标准品建立的标准曲线在一条直线上;3个外标准品的变异系数(CV)分别为2.60%、2.47%、2.44%;H5亚型禽流感病毒培养液、确诊人感染高致病性禽流感患者标本为阳性扩增结果,而其它流感病毒临床标本及阴性对照均呈阴性.结论 本研究建立的实时荧光定量RT-PCR方法具有敏感、快速、重复性好的特点,适合于H5亚型禽流感病毒的快速定量检测.

关 键 词:实时荧光定量RT-PCR  H5亚型禽流感病毒(AIV H5)  血凝素基因

RAPID DETECTION OF AVIAN INFLUENZA VIRUS H5 BY USING REAL-TIME RT-PCR
Abstract:
Keywords:
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