| 人Survivin基因重组腺病毒载体的构建及其表达 |
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| 引用本文： | 李红,刘友生,王长松,葛晓东. 人Survivin基因重组腺病毒载体的构建及其表达[J]. 解放军医学杂志, 2005, 30(6): 479-481 |
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| 作者姓名： | 李红 刘友生 王长松 葛晓东 |
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| 作者单位： | 400038,重庆,第三军医大学西南医院病理学研究所;400038,重庆,第三军医大学西南医院病理学研究所;400038,重庆,第三军医大学西南医院病理学研究所;400038,重庆,第三军医大学西南医院病理学研究所 |
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| 摘 要： | 目的 构建含有人Survivin基因的重组腺病毒载体,为转染树突状细胞(DC)构建DC疫苗和基因治疗奠定基础。方法 自行设计一对分别含有KpnⅠ和XholⅠ酶切位点的Survivin基因上下游引物,以质粒pCITE/Survivin为模板,通过PCR扩增获得Survivin基因全序列。片段回收后经酶切,定向插入腺病毒穿梭质粒pAdTrack CMV,获得重组质粒pAdTrack CMV Survivin。通过KpnⅠ和XholⅠ双酶切、PCR及插入片段测序鉴定后,将正确重组体pAdTrack Survivin转化包含腺病毒骨架质粒pAdEasy 1 的BJ5183菌。同源重组后用选择性培养基筛选阳性克隆,提取质粒,用脂质体介导转染293细胞,通过观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达及PCR扩增目的基因等方法鉴定重组的腺病毒。同时将病毒上清转染成纤维细胞,通过观察GFP的表达以及Western blot分析观察Survivin蛋白表达。结果 成功构建了含有人Survivin基因的重组腺病毒,病毒滴度为1 65×108pfu/L。Western blot检测可见16 5kD的Survivin蛋白表达。结论 该重组腺病毒载体的构建及成功转染到成纤维细胞内表达为下一步以人Survivin作为靶抗原的基因治疗奠定了基础。
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| 关 键 词： | 腺病毒载体 基因疗法 基因 Survivin 树突细胞 |
| 修稿时间： | 2004-11-16 |
Construction of recombinant adenovirus vector containing human survivin gene and expression in fibroblast |
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| Li Hong, Liu Yousheng, Wang Changsong et al. Construction of recombinant adenovirus vector containing human survivin gene and expression in fibroblast[J]. Medical Journal of Chinese People's Liberation Army, 2005, 30(6): 479-481 |
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| Authors: | Li Hong Liu Yousheng Wang Changsong et al |
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| Affiliation: | Li Hong, Liu Yousheng, Wang Changsong et al . Institute of Pathology,Southwest Hospital,Third Military Medical University,Chongqing 400038,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | adenovirus vector gene therapy gene Survivin dendritic cells |
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