白细胞介素10基因修饰的骨髓间充质干细胞抑制大鼠肝纤维化形成的实验研究

目的 观察pcDNA3.0-白细胞介素10 (IL-10)真核表达质粒电穿孔转染的骨髓间充质干细胞(BMSCs)对肝纤维化的治疗效果. 方法 分离纯化大鼠BMSCs,并进行4,6-二脒基-2-苯基吲哚标记;将60只雄性Wistar大鼠随机分为A、B、C三组,每组20只.采用皮下注射四氯化碳(CCl4)方法建立肝纤维化模型.A组、B组大鼠在造模的同时分别尾静脉注射pcDNA3.0-IL-10-BMSCs和BMSCs细胞悬液1ml,其细胞密度为1×10个／ml,每周2次,共8周；C组大鼠尾静脉注射1ml磷酸盐缓冲液.8周后处死大鼠,取肝组织:冰冻切片,观察标记细胞；Masson染色观察纤维化情况；Westem blot检测IL-10表达量；ELISA法检测肿瘤坏死因子α(TNFα)的含量；碱水解法检测羟脯氨酸(HYP)含量.使用SPSS13.0统计软件包进行方差检验,各实验组间两两比较采用q检验.结果 CCl4诱导8周后,Masson染色显示模型鼠大部分形成中度以上肝纤维化；标记的细胞在A组、B组肝组织中均被观察到；纤维化评分和HYP含量:C组分别为(3.15±0.96) μg/mg和(1.89±1.03)μg／mg、A组分别为(1.01±0.35) μg/mg和(0.73±0.29) μg/mg、B组分别为(1.34±0.65)μg/mg和(1.21±0.78) μg/mg,大鼠的肝纤维化程度A组和B组比C组明显减轻,A组比B组程度轻,q值分别为-10.02、-5.01、8.21、4.82和-4.73,尸值均＜0.01,差异有统计学意义；TNF-α含量在A组为(275.21±86.35) pg/mg、B组为(321.76±98.49) pg/mg、C组为(476.23±126.43)pg／mg,A组和B组均低于C组,A组低于B组,q值分别为-12.86、-8.96和-7.43,P值均＜0.01,差异有统计学意义.结论 应用pcDNA3.0-IL-10-BMSCs能有效抑制CCl4诱导的大鼠肝纤维.

Inhibition of liver fibrosis by IL-10 gene-modified BMSCs in a rat model