控制血糖通过下调KLF6而抑制STZ所致的1型糖尿病大鼠肾小管上皮细胞损伤

目的用胰岛素（INS）控制1型糖尿病（DM）大鼠血糖,观察糖尿病肾病（DKD）发病过程中大鼠肾小管上皮细胞核转录因子Krüppel样因子6（KLF6）的表达和作用。方法（1）将SD大鼠随机分为正常对照（NC）组、DM组和INS治疗组（INS组）。采用链脲佐菌素（STZ）复制1型DM大鼠模型,INS组于造模成功4周后给予INS（22U·kg^-1·d^-1）治疗6周。于造模后第10周处死所有大鼠,检测相应生化指标;HE和天狼星红染色观察肾组织病理学变化;免疫组织化学染色法检测肾组织KLF6的表达;Westernblot检测大鼠肾组织中KLF6、过氧化物酶体增殖物活化受体γ（PPARγ）、白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、III型胶原蛋白（ColIII）和Bax蛋白的表达水平;RT-qPCR检测PPARγ的mRNA表达变化。（2）将大鼠近端肾小管上皮NRK-52E细胞予以正常糖（NG）或高糖（HG）培养以及在HG环境中培养24h后置于NG中培养24h（HGtoNG）,或转染KLF6siRNA（si-KLF6）后HG培养及转染KLF6过表达质粒（OE-KLF6）后NG培养,分为NG组、HG组、HGtoNG组、NG+vector组、NG+OE-KLF6组和HG+si-KLF6组,共6组。Westernblot检测KLF6、PPARγ、钙黏蛋白（E-cadherin）、纤维连接蛋白（FN）、IL-6和Bax表达的变化,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果（1）与NC组相比,DM组大鼠肾重/体重、血糖、糖化血红蛋白、甘油三酯、血尿素氮和24h尿蛋白明显升高,肾小管灶性萎缩,系膜及间质轻度节段增生,并伴有胶原的明显沉积,肾组织KLF6、IL-6、TNF-α、α-SMA、ColIII和Bax蛋白表达增多,KLF6阳性染色主要定位在肾小管胞质及胞核,而PPARγ的mRNA和蛋白表达水平均降低。与DM组相比,INS治疗后,上述生化指标均降低,肾组织病理形态学显示肾纤维化病变减轻,KLF6、IL-6、TNF-α、α-SMA、ColIII和Bax蛋白表达均有所降低,而PPARγ的mRNA和蛋白表达水平均升高。（2）过表达KLF6可使NRK-52E细胞中PPARγ和E-cadherin的表达降低,FN和IL-6表达增加,细胞凋亡率增加;敲减KLF6表达可使得上述效应反转。与NG组相比,HG组KLF6、FN和IL-6表达增加,PPARγ和E-cadherin表达减少;与HG组相比,HGtoNG组上述效应反转。结论HG可使KLF6蛋白表达增多,抑制PPARγ的mRNA和蛋白表达;KLF6可能通过抑制PPARγ而影响炎症因子的表达和凋亡反应,加剧了纤维化进程,从而参与DKD的发生发展;而控制血糖可通过下调KLF6而抑制1型DM大鼠肾小管上皮细胞损伤。