西妥昔单抗对乳腺癌MDA-MB-231细胞放射敏感性影响的研究

目的:探讨西妥昔单抗(C225)对乳腺癌MDA-MB-231细胞株的放射增敏作用及其机制。方法:体外培养人乳腺癌MDA-MB-231细胞。使用活细胞计数试剂盒(CCK-8)检测浓度分别为1、5、25、125和625nmol/L C225对乳腺癌MDA-MB-231细胞株的增殖抑制率,计算C225的半数抑制浓度(IC50),并将20%IC50作为后续实验的浓度;观察C225联合X射线照射对MDA-MB-231细胞株增殖抑制的影响,并评价两者的联合效应。采用克隆形成实验检测MDA-MB-231细胞存活率,观察C225对细胞放射增敏性的影响,按多靶单击模型拟合细胞存活曲线,计算反映放射敏感性指标的细胞存活分数(SF2)、平均致死剂量(D0)、准阈剂量(Dq)和放射增敏比(SER)。流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期情况。结果:1)1、5、25、125、625nmol/L C225对细胞的增殖抑制率分别为(3.66±0.26)%、(16.48±1.78)%、(35.41±2.46)%、(47.84±1.67)%和(62.49±2.94)%,C225作用于细胞48h的IC50为(151±2.98)nmol/L。2、4、6和8Gy的照射对细胞的增殖抑制率分别为31.12%、47.95%、59.12%和68.54%;当30nmol/L的C225与上述剂量的照射联合使用,细胞增殖抑制率分别为66.27%、82.03%、89.86%和93.03%,两者表现出协同作用,P<0.05。2)克隆形成实验显示,C225+照射组与单纯照射组相比,克隆形成能力下降,SF2、D0及Dq均下降(P<0.05),放射增敏比(SERD0)为1.41。3)细胞凋亡实验结果显示,C225+0、2、4、6、8Gy照射组凋亡率分别为(11.76±0.81)%、(21.46±1.40)%、(38.23±1.76)%、(44.01±1.23)%和(50.41±1.87)%,均高于单独照射组相应剂量点的凋亡率,分别为(2.94±0.58)%、(10.72±0.34)%、(21.14±1.08)%、(24.12±0.98)%和(30.05±2.64)%,P<0.05。C225联合照射明显增强了照射诱导的细胞凋亡。4)细胞周期分布显示,单独使用C225使细胞阻滞于G0/G1期,并减少S期细胞比例,C225作用后G0/G1期及S期细胞比例分别为(58.35±1.66)%和(31.12±0.23)%,P<0.05;单独照射使细胞阻滞于G2/M期,G2/M期细胞比例为(28.25±1.55)%,P<0.05;C225与照射联合作用后,G0/G1期细胞比例进一步升高,为(59.90±2.21)%,S期细胞比例进一步降低,为(13.67±1.34)%,P<0.05。结论:C225对MDA-MB-231细胞具有放射增敏作用,其机制可能与C225增强放射线对细胞的生长抑制作用、抑制肿瘤细胞亚致死性损伤的修复、增加细胞凋亡和诱导细胞G0/G1期阻滞有关。

Radiation enhancement of cetuximab on human breast adenoma MDA-MB-231 cells line