不同激活方法对小鼠卵母细胞孤雌激活胚胎发育的影响

目的 观察不同激活方法对小鼠卵母细胞激活的影响,以优化核移植的小鼠卵母细胞激活方案.方法 昆明种小鼠经腹腔注射7.5～10U孕马血清促性腺激素(PMSG),48h后腹腔注射同样剂量的人绒毛膜促性腺激素(hCG).注射hCG后14～16h收集卵母细胞,18h后用单个激活剂激活卵母细胞.单个激活剂包括钙离子载体(A23187,5μmol/L,5min)、乙醇(Eth,7%,7min)、氯化锶(SrCl2,10mmol/L,20min).结果 单个激活剂激活小鼠卵母细胞时,卵裂率同其他组(48%～70%)相比,SrCl2组最高(72%).囊胚发育率(9%～20%)均高于对照组(1%,P＜0.05),且SrCl2组囊胚率(20%)高于A23187组(9%)和乙醇组(12%,P＜0.05).单个激活剂同蛋白激酶抑制剂6-二甲氨基嘌呤(6-DMAP)联合使用能使卵母细胞获得完全的激活.乙醇 6-DMAP组(95%和35%)和SrCl2 6-DMAP组(92%和31%)卵裂率和囊胚形成率明显高于其他各组(49%～53%和3%～17%,P＜0.05),两组间没有差异.A23187 6-DMAP组的囊胚率(17%)与对照组(3%)有显著性差异(P＜0.05).本文还比较了6-DMAP在不同浓度(0.2mmol/L和2.5mmol/L)以及不同激活时间(1.5h和3.5h)与单个激活剂(乙醇或SrCl2)组合对小鼠卵母细胞激活的影响.在高浓度(2.5mmol/L)短时间(1.5h)的6-DMAP组合组囊胚率(34%～36%对3～23%,P＜0.05)和卵裂率较高.结论 乙醇和SrCl2与6-DMAP组合,均能较好地激活小鼠卵母细胞,组合中乙醇组合优于SrCl2.此外,6-DMAP的浓度和激活时间也是影响激活效率的重要因素.单个化学激活剂不能完全激活小鼠卵母细胞.

Parthenogenesis of murine oocytes activated by different stimuli